[发明专利]一种裸地胆草素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种裸地胆草素的制备方法尤其是一种采用聚酰胺树脂柱和高速逆流色谱结合提取分离制备裸地胆草素的方法。

背景技术

裸地胆草素（Nudaphantin）分子式为C₂₁H₂₆O₇，分子量为390.43，是从菊科植物裸地胆草Elephantus nudatus Grey全植物中提取分离得到的一种倍半萜内酯类化合物。药理研究表明，裸地胆草素对KB细胞具有细胞毒活性，其ED₅₀为0.31μg/mL。徐峰对裸地胆草分别采用己烷、氯仿和甲醇提取，发现氯仿提取物所得产物为深绿色糖浆，具有极强的细胞毒活性，再经硅胶柱层析和制备TLC分离得到Nudaphantin，并视其为新细胞毒成分。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用聚酰胺树脂和高速逆流色谱结合提取分离裸地胆草素的方法。

本发明所述的一种裸地胆草素的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：

将裸地胆草全株粉碎，经甲醇或乙醇溶液超声提取，提取液加2-8%药用活性炭脱色，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，用正丁醇萃取浓缩液2-4次，浓缩萃取液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，以二氯甲烷-乙醇混合溶液为洗脱剂梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。

所述二氯甲烷-乙醇混合溶液为洗脱剂梯度洗脱，依次按体积比10:1、5:1、1:1进行洗脱，TLC跟踪监测，收集裸地胆草素洗脱液。

所述高速逆流色谱法分离纯化溶剂系统选用环己烷-甲酸乙酯-乙醇-水，体积比为（3-5）：（3-5）：（5-7）：（2-4）。

本发明的有益效果在于：本发明先用聚酰胺树脂柱层析对目标成分进行富集，降低了后续工序的处理量，高速逆流色谱法分离纯化样品损失小、产品纯度高、制备量大。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

将裸地胆草全株药材粉碎，取1000g投入小型提取罐中，加入6L80%甲醇溶液超声提取1.5h，提取2次，合并提取液过滤，加入27g针剂类药用活性炭加热搅拌脱色，过滤除去活性炭，减压回收试剂至无醇味，用150ml正丁醇萃取3次，合并萃取液浓缩至原体积的1/5，与少量聚酰胺树脂拌样，挥干试剂上聚酰胺树脂柱，用二氯甲烷-乙醇混合溶液按体积比10:1、5:1、1:1进行洗脱，TLC跟踪监测，收集裸地胆草素洗脱液，浓缩得裸地胆草提取浸膏。取环己烷-甲酸乙酯-乙醇-水（5:5:7:4）置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取裸地胆草提取浸膏溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到850rpm，以2.0ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图收集裸地胆草素流分，浓缩，低温干燥即得到63mg裸地胆草素，GC检测含量为98%。

实施例2：

将裸地胆草全株药材粉碎，取1000g投入小型提取罐中，加入7L70%乙醇溶液超声提取1h，提取3次，合并提取液过滤，加入52g针剂类药用活性炭加热搅拌脱色，过滤除去活性炭，减压回收试剂至无醇味，用200ml正丁醇萃取4次，合并萃取液浓缩至原体积的1/5，与少量聚酰胺树脂拌样，挥干试剂上聚酰胺树脂柱，用二氯甲烷-乙醇混合溶液按体积比10:1、5:1、1:1进行洗脱，TLC跟踪监测，收集裸地胆草素洗脱液，浓缩得裸地胆草提取浸膏。取环己烷-甲酸乙酯-乙醇-水（3:3:5:2）置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取裸地胆草提取浸膏溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到850rpm，以2.5ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图收集裸地胆草素流分，浓缩，低温干燥即得到61mg裸地胆草素，GC检测含量为97%。

实施例3：