[发明专利]检测DNA样品中预定位点的突变的试剂盒、方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测DNA样品中预定位点的突变的试剂盒、引物组合、方法及应用。

背景技术

在特定位点形成突变是分子生物学实验中常用的研究手段，可以有助于分析特定位点的点突变对于基因功能的作用。通常而言，在构建了目标突变体后，如何对该位点是否正确发生了突变，是本领域技术人员所面临的问题。

然而，目前分子生物学领域中，对于特定位点突变的检测仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效检测DNA样品中预定位点的突变的方法。

根据本发明的第一方面，本发明提出了一种检测DNA样品中预定位点的突变的方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤：使用扩增引物对所述DNA样品进行PCR扩增反应，以便获得扩增产物，所述扩增产物包含所述预定位点；使用延伸引物以及ddNTP，以所述扩增产物为模板，进行寡核苷酸延伸反应，以便获得在所述延伸引物的3’端连接一个碱基的延伸产物，其中，所述延伸引物的3’端紧邻所述预定位点；对所述延伸产物进行分子量检测，以便获得所述延伸产物的分子量；以及基于所述延伸产物的分子量，确定所述预定位点的突变类型。由于延伸反应是以包含预定位点的扩增产物为模板，并且进行延伸反应的延伸引物的3’端紧邻所述预定位点，并且在进行延伸反应时使用ddNTP作为原料，因而可以保证延伸反应可以仅延伸一个碱基，即对应预定的位点，基于各个不同碱基的分子量存在较为显著的区别，因而，通过对延伸产物的分子量进行检测，可以通过所获得的延伸产物的分子量，来确定在预定位点是否发生了突变，以及所发生突变的类型。由此，可以广泛应用于分子生物领域，例如检测是否成功构建了相应的突变体。

根据本发明的实施例，上述检测DNA样品中预定位点的突变的方法还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的一个实施例，所述DNA样品为人全基因组DNA。由此，可以有效地对人类中的基因突变进行检测。

根据本发明的一个实施例，所述预定位点的突变为选自GJB2基因、GJB3基因、SLC26A4基因以及mtDNA的至少一种基因的突变。由此，可以有效地检测与耳聋相关的基因突变。

根据本发明的一个实施例，所述GJB2基因的突变为选自35delG、167delT、176-191del16、299_300delAT和235delC的至少一种，所述GJB3基因的突变为选自位点538C＞T和547G＞A的至少一种，所述SLC26A4基因的突变为选自281C＞T、589G＞A、919-2A＞G、1174A＞T、1226G＞A、1229C＞T、1975G＞C、2027T＞A、2162C＞T、2168A＞G和IVS15+5G＞A的至少一种，以及所述mt DNA的突变为选自1494C＞T和1555A＞G的至少一种。由此，可以有效地检测遗传性耳聋相关的基因突变。