[发明专利]Bt-06A晶体蛋白用于杀灭松材线虫的用途

说明书

技术领域

本发明涉及植物病害的生物防治技术，具体涉及一种Bt-06A晶体蛋白用于杀灭松材线虫的用途。

背景技术

松材线虫，学名Bursaphelenchus xylophilus(Steiner&Buhrer)，异名Bursaphelenchus lignicolus Mamiya&Kiyohara，起源于北美大陆(Wingfield M J，1983；Mamiya Y，1987)，目前该病虫害在世界上分布于北美、东北亚和欧洲部分地区(谢丙炎，2009)。我国自1982年在南京中山陵首次发现该病虫害后，逐年扩大，县级发生区每隔5年翻一番，到2001年底，全国松材线虫县级发生区已达81个，而到2007年7月，已传播、扩散到我国12个省(区、市)的113个县(区、市)，累计致死松树5000多万株，至2009年，该病已经蔓延至我国14个省(自治区直辖市)的192个县级行政区、674个乡镇，2010年扩散到197个县级行政区，2010年发病的县级行政区为197个，到2011年有186个县级行政区，减少27个县级疫区，同时新增加16个疫区，已造成了重大的经济损失和生态破坏。目前，其致病机制尚不完全清楚，同时对松材线虫的防控仍然没有十分有效地途径，形势仍十分严峻。

多年来，对林木害虫的防治主要以化学防治手段为主，化学农药在杀灭害虫的同时，也杀伤了害虫的天敌及其他有益物种，破坏了生态平衡。与化学防治相比，生物防治具有安全、有效、持久的特点，并且避免了上述一系列问题。因此生物防治技术成了人们关注的焦点。在生物杀虫剂中，苏云金芽孢杆菌是目前世界上用途最广、产量最大的一类微生物杀虫剂。

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)，是一种分布极其广泛的革兰氏阳性细菌，其营养体呈杆状，后期在其一端或中央开始形成一个卵圆形的芽孢，亦称内生孢，其形成该过程中，在菌体内一端或两端形成一个或多个形状一致或不同的伴孢晶体(parasporal crystal)如cry5、cry6、cry12、cry13和cry14，对多种昆虫以及线虫、螨类和其他一些原生动物有特异杀虫活性，而Bt晶体蛋白对哺乳动物和其他脊椎动物没有毒性(Betz et al.，2000)，基于此苏云金芽胞杆菌(Baclillus thuringiensis，Bt)晶体毒性蛋白被广泛的用于控制昆虫类害虫(Cannon，1996；Schnepf et al.，1998；Maagd et al.，1999)，目前Bt是转基因抗虫工程植物重要的基因来源，Bt已成为化学合成农药的有力替代品，转Bt晶体蛋白基因的植物的种植面积正在逐年增大，到2005年，转bt基因棉花的种植面积已经超过2600万公顷(James，2005)，目前，种植面积仍在继续扩大。

目前，G.Borgonie等(G.Borgonie，M.Claeys，F.Leyns，G.Arnaut，D.De Waele，A.V.Coomans，Effect of nematicidal Bacillus thuringiensis strains on free-livingnematodes.1.Light microscopic observations，species and biological stage specificity and identification of resistant mutants of Caenorhabditis elegans，Fundamental and Applied Nematology，Vol.19(1996)，pp.391-398)证明Bt晶体蛋白对模式线虫有致死作用，Xiang-Qian Li等(Xiang-Qian Li，Jun-Zhi Wei，Anderson Tan and Raffi V.Aroian。Resistance to root-knot nematode in tomato roots expressing a nematicidal  Bacillus thuringiensis crystal protein Plant Biotechnology Journal(2007)5，pp.455-46)记载了Bt晶体蛋白对根结线虫具有抗性，但是，到目前为止，未见到该晶体蛋白在松材线虫的杀虫活性方面的报道，更未见过这方面的应用。

发明内容