[发明专利]一种从红花钓钟柳中分离制备毛蕊花糖苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于药物资源领域，特别是涉及利用一种高速逆流色谱快速简便地从红花钓钟柳中分离制备高纯度毛蕊花糖苷的方法。

背景技术

毛蕊花糖苷，又名麦角甾苷、阿克苷，英文名：Verbascoside、Acteoside、Kusaginin，分子式C₂₉H₃₆O₁₅， 分子量 624.59。结构式：

毛蕊花糖苷和松果菊苷具有抗氧化、抗衰老、治疗慢性肾小球肾炎等多种功能，主要来源于我国传统中药肉苁蓉，且是中国药典评价其质量的主要指标。肉苁蓉和其寄主藜科植物梭梭在我国主要分布于新疆、内蒙古和甘肃的荒漠和戈壁一带，近年来，国内外市场对该药用植物资源需求的日益扩大，其商业价值不断增长，在经济利益的驱动下，人们无控制地大量挖掘，破坏了当地荒漠草原植被，造成沙区生态环境的严重恶化。目前，我国野生肉苁蓉资源枯竭，其也被列为国家二级保护植物，收入《国际野生植物保护目录》，同时被列入濒临绝种野生动植物种国际贸易公约附录二。肉苁蓉人工栽培不仅受地域限制，且技术难度高、周期长、见效慢，寻找富含毛蕊花糖苷替代资源迫在眉睫。

红花钓钟柳原产中美洲一带，为多年生草本花卉，因耐寒耐旱、花期长、花色鲜艳而被作为观赏植物广泛引种于我国许多地区。此前已有文献报道红花钓钟柳中富含松果菊苷。

目前，毛蕊花糖苷的分离多采用柱层析法，但操作起来十分繁琐，且分离效率不高，很难得到高纯度的样品。高速逆流色谱是一种液液色谱，无固体相，它的分离原理是利用样品在两种互不相溶固定相和流动相的溶剂中分配比不同而进行分离的。和传统的液固色谱比较，该色谱法具有几个突出的优点：消除了传统液固色谱中，固相载体的不可逆转吸附导致的峰拖尾，样品损失，污染或失活；成本低廉，和高效液相色谱比起来，高速逆流色谱仪器较为便宜，无须昂贵的固定相载体柱，流动相无须色谱纯，使用分析纯即可；高回收率，高效率，由于流动相和固定相均为液体，样品可全部回收，且易于规模化生产；操作简便。如今，高速逆流色谱逐渐被用于天然产物化学成分的分析和制备分离。所涉及的天然产物包括黄酮类、糖类、皂苷类、生物碱类、葸醌类、多酚类、香豆素类、多肽，以及蛋白质、多糖、抗生素等生物大分子物质和稀有元素、重金属元素等无机物。

发明内容

本发明提供了一种利用高速逆流色谱法从红花钓钟柳中分离制备高纯度毛蕊花糖苷的方法。

实现本发明的技术方案包括以下步骤：（1）将红花钓钟柳原料洗净晒干，粉碎过筛；（2）以醇类溶剂为溶媒进行超声波提取；（3）上述提取液经浓缩后，经大孔吸附树脂分离，之后合并含毛蕊花糖苷的洗脱液组分；（4）将上述洗脱液组分浓缩干燥后，利用高速逆流色谱进行分离；（5）根据高效液相色谱分析检测结果，收集合并相同组分，浓缩干燥后，得到产物毛蕊花糖苷。

所述作为超声波提取溶媒的醇类溶剂为体积比30%～70%的甲醇、乙醇和正丁醇溶液中的任一种。

所述的大孔吸附树脂为D101、AB-8、ADS-7、HZ806中的任一种。

所述高速逆流色谱为半制备型。

所述的利用半制备型高速逆流色谱进行分离，是指以正丁醇—乙酸乙酯—乙醇—水为组成的溶剂系统，其体积比为4～5︰0～1︰0～1︰4～5，参数为正转转速800 r/min，流动相流速2 ml/min，检测波长280 nm，温度25℃。

所述的HPLC色谱条件为：Phenomenex C₁₈-ODS色谱柱 (150 mm × 4.6 mm, 5 μm)，流动相A︰B（22︰78，v/v），其中流动相A为甲醇︰乙腈（3︰2，v/v），流动相B为0.1%的磷酸水溶液，流速1.0 ml/min，检测波长330 nm，柱温30℃，进样量20 μl。

化合物的鉴定：应用Perkin-Elmer Spectrum One NTS红外光谱仪和Varian INOVA-600核磁共振波谱仪分别进行IR，¹H-NMR和¹³C-NMR谱的鉴定。

本发明优点如下：首先，来源红花钓钟柳富含毛蕊花糖苷，资源丰富，简单易得；其次，以大孔吸附树脂粗分毛蕊花糖苷，具有溶剂毒性低、制备量大，以半制备型高速逆流色谱制备，具有分离时间短、样品无损失、回收率高、节约溶剂、产品纯度高等特点。

附图说明

图1为实施例1从红花钓钟柳中分离毛蕊花糖苷的高速逆流色谱图。

具体实施方式