[发明专利]甜叶菊酶VI及莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法

权利要求书

1.甜叶菊酶VI，其特征在于：它是从甜叶菊的叶中提取得到，制备方法如下：

(1)将甜叶菊叶片与pH值为7.0-9.0磷酸盐缓冲液按1∶2-1∶4m/v的重量体积比混合，于30-50℃浸泡0.5-1h后进行细胞壁破碎1-2h，得细胞浆；

(2)离心步骤(1)所得细胞浆，取上清液过超滤膜，超滤膜规格为8-12kD，跨膜压力控制在1.0-1.5MPa，收集截留液；

(3)使用葡聚糖凝胶按分子量对步骤(2)所得截留液分段，其中分子量在50～56kD的酶即为甜叶菊酶VI。

2.根据权利要求1所述的甜叶菊酶VI，其特征在于：它是从甜叶菊的叶中提取得到，制备方法如下：

(1)将甜叶菊叶片与pH值为8.0磷酸盐缓冲液按1∶3m/v的重量体积比混合，于40℃浸泡0.5h后进行细胞壁破碎1h，得细胞浆；

(2)离心步骤(1)所得细胞浆，取上清液过超滤膜，超滤膜规格为10kD，跨膜压力控制在1.5MPa，收集截留液；

(3)使用葡聚糖凝胶按分子量对步骤(2)所得截留液分段，其中分子量在50～56kD的酶即为甜叶菊酶VI。

3.甜叶菊酶VI的制备方法，其特征在于：它是从甜叶菊的叶中提取得到，制备方法如下：

(1)将甜叶菊叶片与pH值为7.0-9.0磷酸盐缓冲液按1∶2-1∶4m/v的重量体积比混合，于30-50℃浸泡0.5-1h后进行细胞壁破碎1-2h，得细胞浆；

(2)离心步骤(1)所得细胞浆，取上清液过超滤膜，超滤膜规格为8-12kD，跨膜压力控制在1.0-1.5MPa，收集截留液；

(3)使用葡聚糖凝胶按分子量对步骤(2)所得截留液分段，其中分子量在50～56kD的酶即为甜叶菊酶VI。

4.根据权利要求3所述的甜叶菊酶VI的制备方法，其特征在于：它是从甜叶菊的叶中提取得到，制备方法如下：

(1)将甜叶菊叶片与pH值为8.0磷酸盐缓冲液按1∶3m/v的重量体积比混合，于40℃浸泡0.5h后进行细胞壁破碎1h，得细胞浆；

(2)离心步骤(1)所得细胞浆，取上清液过超滤膜，超滤膜规格为10kD，跨膜压力控制在1.5MPa，收集截留液；

(3)使用葡聚糖凝胶按分子量对步骤(2)所得截留液分段，其中分子量在50～56kD的酶即为甜叶菊酶VI。

5.莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于：其步骤如下：

A、将纯度为＞90％的莱鲍迪苷A按1∶6～1∶10m/v的重量体积比加水溶解；

B、按下述重量配比加入尿嘧啶二磷酸葡萄糖，莱鲍迪苷A∶尿嘧啶二磷酸葡萄糖＝15∶5～15∶9；

C、按下述重量配比加入权利要求1或2所述的甜叶菊酶VI：莱鲍迪苷A 800-1200份、甜叶菊酶VI 1份，然后在40～60℃、pH 6～8下反应3～7h；优选，莱鲍迪苷A 1000份、甜叶菊酶VI 1份；

D、过滤反应液，干燥即得含有莱鲍迪苷D的固形物。

6.根据权利要求5所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于：步骤A中莱鲍迪苷A加水溶解时，水温控制在30～40℃。

7.根据权利要求5所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于：步骤A中莱鲍迪苷A加水溶解后，以60～120rpm的速度搅拌30～60min。

8.根据权利要求5所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于：步骤D过滤反应液时采用8-12kD超滤膜过滤；过滤时优选跨膜压力控制在0.5～1.5MPa。

9.根据权利要求8所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于：步骤D过滤反应液后，浓缩处理。

10.根据权利要求9所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于：所述浓缩条件为在60-80℃浓缩反应液。