[发明专利]采用发酵法制备富马酸发酵液及富马酸发酵液分离提取纯品富马酸的方法

权利要求书

1.一种采用发酵法制备富马酸发酵液的方法，以葡萄糖为原料，以米根霉菌株（Rhizopus  Oryzae  ClCC 40506）为出发菌株，依次按照种子培养和发酵二个步骤进行，制备以富马酸为主的富马酸发酵液；所述发酵步骤，是将种子培养步骤所制备的种子液，与含有葡萄糖的发酵培养基，按一定的体积比接种于已灭菌的装有发酵培养基的发酵罐内实施发酵，其特征在于：

a、按发酵罐体积的55~75%将发酵培养基加入发酵罐内，按发酵培养基体积的5~15%接种由种子培养步骤制备的种子液，发酵温度为30~40℃，搅拌转速为150~300RPm;

b、通入空气策略为：前24h维持通气量为1.0~1.2vvm，24~36h维持通气量为0.5~0.6vvm，36~48h维持通气量为0 vvm，48~60h维持通气量0.5~0.6 vvm，60~72h维持通气量为1.0~1.2 vvm，72h后继续维持通气量1.0~1.2 vvm，并流加无菌葡萄糖溶液，维持发酵罐中葡萄糖浓度20~30g/L，直至100~105h发酵结束，即获得所述富马酸发酵液。

2.根据权利要求1所述的采用发酵法制备富马酸发酵液的方法，其特征在于，所述发酵培养基的组分及各组分单位体积的重量含量是：葡萄糖40~120 g/L，磷酸二氢钾0.6~1.0 g/L，尿素0.1~0.3 g/L，硫酸镁0.5~0.6 g/L，硫酸锌0.1~0.15 g/L，硫酸亚铁0.0088~0.01 g/L，碳酸钙40~50 g/L；通过一定浓度的酸或碱的加入，令发酵培养基的PH值维持在2.75~3.25范围内。

3.根据权利要求1所述的采用发酵法制备富马酸发酵液的方法，其特征在于，所述种子培养步骤的种子培养基的组分及各组分单位体积的重量含量是：葡萄糖10~30 g/L，磷酸二氢钾0.6~1.0 g/L，硫酸铵1~3 g/L，硫酸镁0.5~0.6 g/L，硫酸锌0.1~0.15 g/L，硫酸亚铁0.0088~0.01 g/L；在对所述种子培养基灭菌完毕后，用无菌稀硫酸调节其PH值维持在2.5~3.5范围内。

4.一种如权利要求1所制备的富马酸发酵液分离提取纯品富马酸的方法，以如权利要求1所获得的所述富马酸发酵液为原料，其特征在于，依次按照如下步骤进行：

a、将所述富马酸发酵液加热至60~90℃，缓缓加入固体钠盐，钠盐的加入量为所述发酵液中富马酸总质量的0.8~1.2倍，搅拌30~60min；

b、将步骤a的料液进行抽滤或压榨，除去细胞菌体以及包括过剩固体碳酸钙在内的其它固体杂质，得到澄清滤液；

c、在步骤b的澄清滤液中加入较高浓度强酸，调节澄清滤液的PH至1.0~2.0之间，得到含有一定量沉淀颗粒的酸化液；

d、将步骤c的酸化液进行抽滤或压榨，收集主要成分为富马酸以及一定量的不溶性钙盐以及杂蛋白的固体沉淀，而所述滤液可循环用于步骤a；

e、将步骤d所得的固体物料用热水浸泡洗涤，并加热至70~80℃，搅拌10~30min，抽滤得到澄清滤液，所得滤液室温冷却24h，至大量沉淀固体析出，固体为富马酸产品；

f、将步骤e富马酸产品用清水浸泡洗涤，浸泡用水量为固体富马酸质量的5~10%;

g、将步骤f浸泡洗涤后的富马酸固体通过流化床在60~80℃温度下烘干，得到富马酸纯品。

5.根据权利要求4所述的富马酸发酵液分离提取纯品富马酸的方法，其特征在于，步骤a加入的所述钠盐是碳酸钠或者是硫酸钠。

6.根据权利要求4所述的富马酸发酵液分离提取纯品富马酸的方法，其特征在于，步骤c所加入的强酸是硫酸或盐酸或硝酸或磷酸，首选的是硫酸。