[发明专利]抑制丙型肝炎病毒侵染细胞的多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于预防HCV感染的技术领域，涉及抑制丙型肝炎病毒侵染细胞的多肽及其应用。

背景技术

HCV(丙型肝炎病毒)为黄病毒属，单股正链RNA病毒，由结构蛋白(Core、E1、E2)和非结构蛋白(NS2～NS5B)组成。HCV是丙型肝炎的病原体，急性感染后约75％发展为慢性肝炎，其中约20％结局为肝硬化或肝功能衰竭，并有可能进一步发展为肝癌。目前全世界有1.7亿感染者，我国约有4000万，HCV感染已经成为全球性的社会公共卫生问题之一。

HCV因病毒自身的高变异性，给疫苗研究造成极大困难。现今对HCV感染的治疗仅限于单独使用干扰素(interferon，IFN)，或者与广谱抗病毒药物利巴韦林(ribavirin)联合用药，但治疗效果不佳，有一定的副作用，且不同型别对IFN反应性差别较大。多年来研究者一直在寻找防治感染的有效靶点，但还未得到特异有效的抑制剂，使用效果仍在实验或临床研究初步评估阶段。

根据病毒与细胞相互作用的理论，病毒与宿主细胞膜表面受体的特异性结合是病毒感染的始动环节，型别不同的同种病毒在与细胞结合过程中作用分子一般是固定的，阻断二者之间的结合，即可有效地抑制病毒性感染的发生。2003年美国FDA批准抗人免疫缺陷病毒(HIV)的新药T-20(又名Enfuvirtide或)上市，T-20是穿入抑制剂中第一个上市的药物，含有36Aa，能够与HIV包膜糖蛋白gp41结合，阻止病毒与靶细胞的融合，临床试验证明效果较好，受试者副反应较小(Cervia JS，et al.Enfuvirtide(T-20)：a novel human immunodeficiency virus type 1fusion inhibitor.Clin Infect Dis.2003；37(8)：1102-6)。

目前已经确证HCV包膜糖蛋白E1-E2是与宿主细胞受体结合的唯一关键性分子，其中E2被认为是最重要的分子。1998年Pileri等的研究表明人CD81(hCD81)可能是HCV的受体(Pileri，P.et al.Binding of hepatitis C virusto CD81.Science.1998；282：938-941)。随后低密度脂蛋白受体(LDLR)(Agnello V，et al.Hepatitis C virus and other flaviviridae viruses enter cells vialow density lipoprotein receptor.Proc Natl Acad Sci USA.1999；96：12766-71)、清道夫受体B族I型(SR-BI)(Scarselli E，et al.The human scavenger receptorclass B type I is a novel candidate receptor for the hepatitis C virus.EMBO J.2002；21(19)：5017-25)、钙离子依赖型(C型)凝集素DC/L-SIGN(PohlmannS，et al.Hepatitis C virus glycoproteins interact with DC-SIGN and DC-SIGNR.JVirol.2003；77(7)：4070-80)、Occludin(Ploss A，et al.Human is a hepatitis Cvirus entry factor required for infection of mouse cells.Nature.2009；457：882-6)和细胞连接骨架蛋白Clauding-1(Evans MJ，et al.Claudin-1is a hepatitis Cvirus coreceptor required for a late step in entry.Nature.2007；446：801-5)等都被证实是HCV的可能受体，目前比较一致的看法是HCV通过包膜糖蛋白E2与CD81特异性结合，使病毒吸附于宿主细胞表面，但由于CD81介导的内吞作用弱，病毒最终进入细胞可能还需其他分子，如LDLR、SR-BI等来辅助，Clauding-1则在病毒穿入过程的后期起到关键作用(Helle F，et al.Hepatitis C virus entry into host cells.Cell Mol.2008；65：100-12)。不同研究小组利用噬菌体肽库法筛选HCV的穿入抑制剂，结果显示具有SPQYWTGPA基序的多肽可以竞争抑制HCV E2与hCD81的结合(Cao J，et al，Phage displayselection on whole cells yields a small peptide specific for HCV receptor humanCD81.Cell Res.2003；13(6)：473-9)、具有TSQNIRS基序的多肽可以抑制HCV侵染细胞(Hong HW，et al.Selection of Peptides Binding to HCV E2andInhibiting Viral Infectivity.J Microbiol Biotechnol.2010；20：1769-71)，这些都显示了以阻断HCV与受体结合为基础设计抗病毒药物的可行性(MeanwellNA.Hepatitis C virus entry：an intriguing challenge for drug discovery.Curr OpinInvestigate Drugs.2006；7(8)：727-32.和Pawlotsky JM，et al.The hepatitis Cvirus life cycle as a target for new antiviral therapies.Gastroenterology.2007；132(5)：1979-98)。