[发明专利]金银花组培繁殖方法

说明书

技术领域    

本发明涉及一种植物的繁殖方法，特别是金银花的组培繁殖方法。

背景技术    

金银花属于忍冬科植物，全草均可入药，花蕾含有挥发性芳香油、肌醇、皂苷、绿原酸、黄酮类化合物、肉桂酸、橙花醇、茉莉醛等，茎中含有生物碱，叶中含有忍冬甙和木犀素等，是传统中药材之一，也是药食两用的原料，具有清热解毒，凉散风热，保肝利胆的功效，在中医领域一直用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温热发病的治疗；现在更多的用于保健养生茶饮，金银花茶香气宜人，可以制作饮料，对防治盛夏中暑、上呼吸道感染、风热感冒和肠胃疾病有良好的效果，对清除人体自由基、延缓衰老、提高人体免疫机能等具有良好的作用，因而也是高血压和心血管系统患者降低胆固醇的保健佳品；金银花集观赏药用于一身，经济价值高，市场需求量很大，因而需要大量繁殖金银花。目前，金银花主要以扦插、播种、嫁接、压条等传统方法进行繁殖，不仅受季节限制，而且成活率很低，不能满足大规模生产的需要；嫁接繁殖虽然植株适应性强，根系发达的优点，但须大量采集野生资源，而且工序繁杂，成活率也很低。发明专利申请号200610050985.4公开了“灰毡毛忍冬金银花高效繁殖技术”，采用先进的扦插方法，但其方法繁杂，其成活率也只有70%。

发明内容    

本发明所要解决的技术问题是提供一种方便大面积推广且不受季节限制，可快速大量繁殖的金银花组培繁殖方法。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是以带腋芽的金银花枝条为材料，进行金银花腋条组织培养繁殖，其步骤如下：

1.引种和灭菌：从室外选取健壮、无病虫害带腋芽或顶芽的金银花嫩茎段，截成10-13cm的小段，剪去叶，留叶柄基部，用洗衣粉溶解于水清洗3-5分钟，再放到浓度为0.1%的升汞液中处理15-17分钟，为防止污染，可适当加入少量链霉素，然后用无菌水清洗4-5次，彻底除去升汞。

2.诱导和分化培养：接着取出外植体，用无菌滤纸吸干多余水分，接种在分化培养基上，培养温度25-28℃，湿度50%，光照强度1500-3000Lx，光照时间为每天10-12小时；材料接种15天后，基部产生少量黄白色的愈伤组织，20天左右逐渐形成丛生芽，25天左右腋芽长出2-3cm。

3.增殖培养：待腋芽长出2-3cm时，再进行分段处理，剪切成2.0-2.5cm长的茎段，将茎段转接至丛生芽增殖培养基上，培养温度25-28℃，湿度50%，光照强度1500-3000Lx，光照时间为每天10-12小时；经过25天左右，芽苗可长到2.0-3.0cm高，在丛生芽增殖倍率达6-7倍时，调低培养温度至21℃，每天增加光照时间至12-14小时，以培养壮苗，为生根打下基础。

4.生根培养：选取生长健壮，高达2.5cm的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上，在温度23-25℃、湿度50%，光照强度1500-3000Lx，光照时间为每天10-12小时的环境下培养2周左右，小苗将长出白色短根，生根率达80%，20天时，生根率达98%。

其中， MB母液的配制成分和重量比为：大量元素：硝酸钾1.5g、二水氯化钙0.3g、硝酸镁0.22g、磷酸二氢钾0.17g、硝酸铵0.15g、硫酸铵0.2g、磷酸二氢钠0.04g；铁盐：EDTA0.0373g、硫酸亚铁0.0278g；微量元素：碘化钾0.00083g、七水硫酸锌0.0086g/L、硼酸0.0062g、一水硫酸锰0.0223g、二水钼酸钠0.00025g、无水硫酸铜0.000025g、氯化钴0.000025g；有机物：甘氨酸0.002g、烟酸0.0005g、盐酸吡哆辛0.0005g、盐酸硫胺0.0004g、肌醇0.05g；激素(单独配制)：6-BA1g/L、IBA1g/L、NAA1g/L。

分化培养基为：MB+BA1.0-2.0mg/L+NAA0.3-0.5mg/L+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8。

丛生芽增殖培养基为：MB50ml+微量元素3.3ml+铁盐5ml+有机物5ml+6-BA0.4ml+IBA0.1ml+白糖30g+卡拉胶6g，pH值为5.8。

生根培养基为：MB25ml+有机物、铁盐、微量元素各5ml+IBA3ml+糖20g+卡拉胶6g+AC0.5g，pH值为5.8。

各培养基需灭菌，将配制好的培养基装进灭菌器里，调节温度达到121℃时,记时灭菌21分钟，灭菌完后，把灭菌好的培养基迅速转移到无菌室储存起来。