[发明专利]检测马脑炎病毒抗体的金标免疫试纸条及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种可同时检测东方马脑炎病毒抗体、西方马脑炎病毒抗体、委内瑞拉马脑炎病毒抗体及其可分别定量检测的金标免疫试纸条及其制备方法和应用。 

背景技术

东方马脑炎病毒（Eastern Equine Encephalitis Virus, EEEV）属 A组虫媒病毒披膜病毒科甲病毒属，含单股正链 RNA，该病毒主要是通过蚊媒传播，而且可以经含有病毒的气溶胶通过呼吸道感染人类，其引起的脑膜脑炎，是一种急性、病毒性、人畜共患自然疫源性的传染性疾病。感染后发病率高，传染性强，致死率高，缺乏有效的预防方法，病愈后多留有后遗症，对人群危害性大，所以被国际社会列为防制生物恐怖的主要病种之一,备受世界各国关注。 

我国对东方马脑炎病毒生物战剂的侦检和医学防护等研究尚处于空白，更缺乏中、长期研究发展规划，针对东方马脑炎病毒的恐怖袭击尚无配套诊断试剂和有效免疫治疗和防护手段，所以发明快速、简便、能适合现场检测的检测东部马脑炎病毒的方法刻不容缓，对我国在国际社会上的形象和检测地位具有非常重要的意义。

西方马脑炎（Western Equine Encephalitis，简写为WEE）（以下简称为西马）是由西马病毒引起的能使人类和马等多种动物致死性的一种急性病毒性脑炎。西马病毒可经呼吸道传播感染，但主要是由蚊虫传播，西马病毒的抗原性是由囊膜糖蛋白E1和马脑炎病毒决定的。E1含有一个中和抗原位点，感染西马病毒后会产生相应抗体，所以检测西马病毒E1C抗体即可得知是否有感染该病毒。1990年何海怀等从新疆乌苏县采集的按蚊和博乐县的全沟硬蜱中分离出西马病毒。吕新军等在对我国人体血清调查中发现，西马病毒抗体阳性率为2.71%。这些情况都证实了西马病毒在我国的存在，说明了西马病毒有可能成为我国感染性疾病的新病原之一。 

委内瑞拉马脑炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus，简写为VEEV）（以下简称为委马病毒）是属于披膜病毒科、甲病毒属，基因组为单股正链RNA的可引起委内瑞拉马脑炎的烈性病毒。该病毒主要由蚊虫吸血传播，可引起马匹、人类或其他动物患病，研究表明，气溶胶也是一种较重要的传播途径。该病毒有较高的发病率和致死率，病愈后还会留有后遗症，已被美国疾病预防控制中心列为生物恐怖剂。虽然我国境内还未有发现委内瑞拉马脑炎病毒的报道，但是随着国际旅游和贸易交往日益频繁，携带此病毒传入我国的风险系数以及潜在的生物恐怖袭击的危险日益增加，所以我国国内尤其是出入境口岸应提高警惕，加强对委马病毒的检测，防止该病毒在我国的暴发和流行。 

金标免疫层析法（GICA）是20世纪90年代以来在单克隆抗体技术、金标技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。近年来发展迅速，在生物医学领域特别是医学检验中得到了广泛应用。该技术主要是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在NC 膜上，金标标记试剂吸附在结合垫上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过虹吸原理向前移动，溶解结合垫上的金标标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待测物和金标试剂的复合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，通过目测的金标标记物得到直观的显色结果。而流离标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离的目的。由于快速简便、准确，具有高度特异性和高敏感性，结果直观可靠，而且试剂和样品用量极少，每个样品只需1-2μl,无需仪器设备，简化了烦琐的常规操作过程，同时也减小了因操作引起的误差，金标免疫层析技术是一种目前发展最快的复合型免疫层析技术。金标本身为红色，不需要加入显色试剂，对人体无毒害。目前该技术已经在临床医学检验广泛应用，被认为是微生物和传染病及寄生虫病诊断中最有前途的新技术之一。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用方便、检测快捷、定性、特异性和敏感性高、可同时检测东方马脑炎病毒抗体、西方马脑炎病毒抗体、委内瑞拉马脑炎病毒抗体的免疫层析试纸条及可其分别定量检测的金标免疫层析系统，本发明的另一目的是提供一种上述试纸条的制备方法和应用。