[发明专利]一种用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的方法

权利要求书

1.一种用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的方法，其特征在于用复合膜来固定化脂肪酶的方法通过以下步骤实现：一、复合膜的制备：将15g醋酸纤维素60℃下溶于85g二甲基甲酰胺中得到铸膜液。将聚四氟乙烯膜先用0.1mol/L的NaOH溶液和0.1mol/L的HCl溶液清洗，然后用去离子水清洗，真空干燥后，平铺在洁净的玻璃板上。将醋酸纤维素铸膜液用特制的刮刀涂在聚四氟乙烯膜表面，控制厚度，在室温下挥发适当的时间完成干相转换后，浸入去离子水完成湿相转换。12h后用去离子水清洗，自然干燥待用；二、脂肪酶的固定化：取若干份1cm²的醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜于三角瓶中，分别加入一定量的酶液和pH 7.5的磷酸氢二钠/磷酸二氢钾缓冲液，恒温搅拌吸附一定时间(25℃，170r/min)。再加入一定量戊二醛进行交联反应，反应结束后取出酶膜，用去离子水冲洗，放于干燥处待其风干后测定酶活。三、酶活力的测定：采用橄榄油乳化法；四、固定化条件的优化：分别在温度5～35℃，吸附时间0.5～3h，酶液浓度0.005～0.03g/mL，交联时间1～6h，交联剂浓度0.05～0.3％的条件下，通过测定固定化酶活力得到最佳的固定化条件。五、固定化酶酶学性质的讨论：在温度15～55℃，pH 5.5～9.5范围内，通过测定固定化酶和游离酶的活力，得出固定化酶的最适温度，最适pH值。并通过重复使用固定化酶水解橄榄油来讨论固定化酶的使用稳定性。六、通过固定化酶膜的SEM图像进一步解释利用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的优势。

2.根据权利要求1所述的用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶，其特征在于步骤四中将醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜与酶液在温度20～30℃的条件下进行脂肪酶的吸附固定。

3.根据权利要求1所述的用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶，其特征在于步骤四中将醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜与酶液在温度5～35℃的条件下，吸附固定2～3h。

4.根据权利要求1所述的用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶，其特征在于步骤四中将醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜与酶液在温度5～35℃，吸附时间0.5～3h，的条件下，添加浓度为0.015～0.025g/mL的酶液。

5.根据权利要求1所述的用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶，其特征在于步骤四中将醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜与酶液在温度5～35℃，吸附时间0.5～3h，酶液浓度0.005～0.03g/mL的条件下，与戊二醛交联2～4h。

6.根据权利要求1所述的用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶，其特征在于步骤四中将醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜与酶液在温度5～35℃，吸附时间0.5～3h，酶液浓度0.005～0.03g/mL，与戊二醛交联1～6h的条件下，添加浓度为0.15％～0.25％的交联剂。

7.根据权利要求1所述的用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶，其特征在于步骤五中将固定化酶与游离酶在温度25～45℃条件下，比较固定化酶与游离酶的最适温度。

8.根据权利要求1所述的用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶，其特征在于步骤五中固定化酶与游离酶在pH7～9.5条件下，比较固定化酶与游离酶的最适pH值。

9.根据权利要求1所述的用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶，其特征在于步骤五中将固定化酶重复使用10次来水解橄榄油，得到固定化酶的相对酶活力为原酶活的55.5％。