[发明专利]一种负载生物活性因子的仿生涂层制备方法

权利要求书

1.一种负载生物活性因子的仿生涂层的制备方法，通过以下步骤实现：

（1）RGD接枝的聚电解质的制备： 

将含双硫键的RGD多肽链段GRGDSPC(S-S)CPSDGRG在碳化二亚胺：N-羟基琥珀酰亚胺催化体系存在的条件下，接枝到聚电解质上，将所得到的产物透析纯化后，加入木苏糖或者谷胱甘肽与之反应，得到甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-SH接枝的聚电解质，聚电解质分别为聚阳离子聚电解质和聚阴离子聚电解质；

所述的RGD是含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的线性七肽结构，其肽链结构为甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-SH；

所述聚电解质的浓度为0.1-50mg/ml，多肽链段的量与聚电解质中羧基含量的摩尔比为1：10000-1：1，碳化二亚胺: N-羟基琥珀酰亚胺的用量为1：1-20：1, 碳化二亚胺的用量与多肽链段的用量的摩尔比为1：1-10：1，木苏糖或者谷胱甘肽的浓度与催化体系中双硫键的摩尔比为1：1-50：1；

（2）聚电解质溶液的配制：

聚阳离子电解质溶液配置：将步骤（1）获得的RGD接枝的聚阳离子聚电解质或未改性的聚电解质阳离子配制成溶液，并在其中添加生物活性因子BMP-2或bFGF；

聚阴离子电解质溶液的配制：将步骤（1）获得的RGD接枝的聚阴离子聚电解质或未改性的聚阴离子电解质配制成溶液；

其中各种聚电解质溶液的浓度范围为0.1mg/ml-10mg/ml，聚电解质溶液中NaCl浓度为0.1-0.2mol/L，pH值为4.0，BMP-2的浓度为0.5-1000μg/ml，bFGF浓度为20-1000μg/ml；

（3）仿生涂层的制备：

将步骤（2）配置的溶液作如下组合：（a）添加生物活性因子BMP-2或bFGF的RGD接枝的聚阳离子聚电解质溶液和未改性的聚阴离子电解质溶液；（b）RGD接枝的聚阴离子聚电解质溶液和添加生物活性因子BMP-2或bFGF的未改性的聚阳离子电解质溶液；（c）添加生物活性因子BMP-2或bFGF的RGD接枝的聚阳离子聚电解质溶液和RGD接枝的聚阴离子聚电解质溶液；

用(a)-(c)任一组溶液，首先在钛基种植体表面沉积聚阳离子电解质和生物活性因子，沉积一定时间后，充分水洗，然后沉积聚阴离子电解质层，沉积一定时间后，充分水洗，以上操作记为一次沉积循环，根据需要重复以上循环操作，最后得到需要的聚电解质复合层，然后，在浓度为0.5-10 mM的氯胺T溶液或者浓度为1-50 mM的双氧水溶液中浸泡，取出，充分水洗，得到负载生物活性因子的仿生涂层；在氯胺T中的浸泡时间为5-180秒，在双氧水中浸泡时间为5-60分钟。

2.根据权利要求1所述的一种负载生物活性因子的仿生涂层的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的所述聚阳电解质选用Ι型胶原、壳聚糖、酸溶明胶、聚精氨酸、聚赖氨酸、聚组氨酸中的一种或者几种，得到的产物是RGD接枝的聚阳离子电解质，聚阳离子电解质的分子量为100-2000000D；聚阴电解质选用透明质酸、碱溶明胶、聚谷氨酸、聚天冬氨酸中的一种或者几种，得到的产物是RGD接枝的聚阴离子电解质，聚阴离子电解质的分子量为100-5000000D。

3.根据权利要求1所述的一种负载生物活性因子的仿生涂层的制备方法，其特征在于，步骤（3）中一层聚阴离子电解质层或聚阳离子电解质层所用的沉积时间为5min-20min，所需的沉积循环为0.5-50次。

4.根据权利要求1所述的一种负载生物活性因子的仿生涂层的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所用的种植体表面为各种永久植入型种植体表面，选用经氧化性酸处理的纯钛或者钛合金表面、非氧化型酸处理的纯钛或者钛合金种植体表面、喷砂/酸处理的表面、碱热法得到的纯钛或者钛合金种植体表面、电化学得到的表面、羟基磷灰石涂层的纯钛或者钛合金种植体表面、钛或者羟基磷灰石喷浆表面的纯钛或者钛合金种植体表面、钛喷浆/酸处理的纯钛或者钛合金表面、离子注入的纯钛或者钛合金种植体表面、或激光处理的纯钛或者钛合金种植体表面。