[发明专利]与老年痴呆症发病相关的细胞周期依赖性激酶5的单核苷酸多态性位点

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及与老年痴呆症发病相关的细胞周期依赖性激酶5的单核苷酸多态性位点。

背景技术

神经退行性病变包括老年痴呆症、帕金森氏病等多种疾病，是老年人群发生痴呆症状的最常见的病因。此类疾病引起神经元细胞和突触的退行性变，脑组织萎缩以及记忆力衰退，严重影响了患者的社交、自理能力，导致生活质量大幅度下降。典型的老年痴呆症病理改变包括：神经细胞内纤维缠结（neurofibrillary tangles, NFTs）和老年斑（senile plaques, SPs）的形成。目前，针对老年痴呆症仍没有有效的治疗手段。

细胞周期蛋白依赖性激酶5 (cyclin dependent kinases 5, CDK5) 基因位于7号染色体，含有12个外显子，编码987个碱基长度的mRNA。CDK5蛋白分子量为33KD，与其激活因子结合后具有激酶活性并能调节细胞周期进程及神经细胞分化。目前大量证据显示，CDK5基因在突触发育，突触可塑性形成中均发挥重要的作用。CDK5活性的异常升高可导致神经细胞死亡，说明CDK5活性的调控对神经细胞存活具有重要的意义。研究表明，Tau蛋白是CDK5的一个重要底物，在老年痴呆症患者脑部组织中被过度磷酸化，并丧失功能^[7]，进而聚合成NFTs。在含有大量NFTs的神经元细胞中，CDK5的活性大大降低，说明了CDK5在NFTs的形成中发挥重要作用^[8]。另一方面，CDK5可以直接磷酸化淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein，APP)的668位点，对SPs的形成也是一重要因素。这些研究结果表明，CDK5不仅能够超磷酸化Tau蛋白，并且还能通过老年斑的形成，从而介导神经元死亡。

虽然大量的研究从分子机制角度阐明了CDK5在AD发生中的作用，但CDK5基因的遗传多态性与AD的关联性研究，特别是在汉族人群中，还鲜有报道。

发明内容

本发明的目的在于通过对CDK5基因全长测序，并与正常对照组比对，我们从中选中了5个单核苷酸多态性位点，发现CDK5基因的多态性可能是AD发生地一个危险因素。

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现：

本发明通过聚合酶链式反应等方法检测47例患者及51例年龄匹配正常对照组中细胞周期依赖性激酶5的基因多态性，综合分析基因频率、等位基因频率分布与老年痴呆症发生的相关性分析，结果显示，与正常对照组相比，rs2069452和rs2069459的等位基因频率和单倍体分析结果表明，其与老年痴呆症的发生存在相关性。

附图说明

图1~4为所选取的5个SNPs及其测序图谱。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。

实施例

病例收集

选择从2008年7月-2009年12月在上海复旦大学附属华山医院就诊的原发性老年痴呆病人47例，均为汉族。AD诊断标准参照美国国家神经疾病和中风研究所 (National Institute of Neurological Disorders and Stroke, NINDS)/阿尔茨海默氏症及相关疾病协会 (Alzheimer's Disease and Related Disorders Association, ADRDA)的诊断标准进行。每个病患均由独立两位神经科医生分别进行病史询问及家系调查，包括：详细的调查问卷，基础水平测试及外周血采集。51例年龄匹配的正常对照组，来自北京大学深圳医院，排除各种器质性疾病的健康人外周血。所有病人都已对收集样本的目的和意义知情并签字同意，所有采样过程均符合北京大学制定的学术道德规范。

聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR)