[发明专利]一种铁皮石斛种子的自然繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种石斛的非试管快繁方法，具体为一种石斛种子的自然繁殖方法，属于生物技术领域。

背景技术

石斛属(Dendrobium)是兰科第2大属，全球有1500多种，我国在原来74种2变种的基础上，增加了10个新种，即86种(变种)，可供药用的有50多种。中药石斛始载于《神农本草经》，列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、润肺止咳的功效。其中铁皮石斛的营养价值最高，其价格也是最高的。种苗快繁方式以组培快繁为主，分株、扦插和高芽繁殖为辅。但是，组培技术成本高、投入大、技术要求严格。针对这些问题，我们在各育苗方法对比调查研究的基础上，提出一种新的种苗快繁途径-铁皮石斛种子自然繁殖技术，它具有操作简单、移栽成活率高、培育成本低等优点。

石斛种子自然繁殖技术即在开放式环境下，为石斛种胚的发育提供适宜的基质、共生真菌、温、光、气、热、营养、激素等环境，让种胚发育成为完整植株的一种新型育苗技术。植物非试管快繁技术是一项利用计算机自动控制技术为植物离体材料创造最佳的温、光、气、热、营养、激素环境，让植物组织的全息性、全能性得以表达，发育成为完整植物的技术。其最为显著的特点是在开放式环境下为植物离体材料的发育提供最佳的环境条件，既摒弃了试管快繁的高投入、难操作、易感染、炼苗难等缺点，又具备了繁殖材料省、繁殖系数高、操作工艺简单、易学实用等优点。目前，该技术在农业生产、园艺和药用植物的种苗快繁上已得到广泛应用。

铁皮石斛种子细小，呈粉末状。每个蒴果含有数万至数十万粒种子，种子呈橄榄形，种皮为1层透明的薄壁细胞，有加厚的环纹，内有一细小的圆形胚，分化不明显，处于原胚阶段。种子长200～450μm，宽90～150μm，粒重1μg左右。由于种胚的发育没有超过球形阶段，又缺乏胚乳组织，必须飘落到非常适宜的环境与真菌共生才能萌发，自然条件下的发芽率不及5％，萌发的石斛种子生长发育十分缓慢，起初仅为一细小的绿珠，光合作用的面积很小，光合强度低，对生境条件要求十分严格。目前，主要在试管内进行种胚无菌播种，其萌发率较高，成熟种胚的萌发率可达90％以上。铁皮石斛的种胚无菌播种需要在培养基中加入蔗糖以满足种胚发育对碳源的需求，而加入糖后的培养基容易被污染，只能在密封的培养瓶里进行培养，并进行严格的消毒杀菌和繁琐的技术操作。其缺点主要表现在以下4个方面：①组培技术难度大，工作人员必须经过严格的培训方能操作。②要实现壮苗并提高移栽成活率有很多技术关键因素，需要不断优化条件和长期的探索，研究人员不愿将技术拱手让给别人特别是同行竞争者，缺少沟通和交流，技术保密性较强。③耗费巨大的人力、动力和空间，成本较高。④移栽成活率低，尽管石斛的组培技术有了突破性进展，但是行内技术层次不齐，很多生产商或药农的试管苗移栽成活率还有待提高。

针对这些问题，我们在各育苗方法对比调查研究的基础上，提出一种新的种苗快繁途径——石斛种子自然繁殖技术，它具有操作简单、移栽成活率高、培育成本低等优点。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种石斛种子的自然繁殖方法，以解决现有技术的上述问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现。

一种石斛种子的自然繁殖方法，具体步骤如下：

1)果实的选择：我们选择果实饱满、100％成熟、自然开裂的种子；

2)培育基质的筛选：利用木材加工的边皮废料或石棉瓦作底构建苗床，以锯木屑、碎树皮、珍珠岩作为基质。苗床高10-15cm、床宽1-1.2m、支架高0.8-1.0m；基质厚度5-10cm；

3)环境的综合控制：生长温度白天为16～21℃，夜间温度为10～13℃，昼夜温差保持在10～15℃；空气相对湿度保持77-83％较适宜，忌干燥、积水；

4)营养生理的应用：通过弥雾的方式给种胚补充萌发和生长所必需的营养元素，营养液为无土栽培的全价营养液培养，或者MS的去糖配方，激素可灵活添加；种子萌发期间，有光照的白天，每隔1h喷碳酸水和富氧水1min，在整个育苗期内如此循环；种子萌发后幼苗期，有光照的白天用去糖MS培养液和0.2～0.5mg/L的NAA混合液，每6h喷洒一次；新芽初期，轮换每周喷施一次高磷钾肥和一次平衡肥；生长期，每周喷施一下平衡肥；生长后期，喷施平衡肥和高磷钾肥交替使用，在采收前2个月停止施肥，也可配合使用农家肥上清液或者采用缓释肥代替喷施叶面肥；

步骤3)中，以夏秋遮光70％、冬季遮光30～50％为宜。

步骤4)中，所述的碳酸水的C0₂浓度为2400mg/kg，富氧水含氧量为60mg/kg。