[发明专利]固相多肽合成生长激素促分泌素五肽的方法

权利要求书

1.固相多肽合成生长激素促分泌素五肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：以2-氯-三苯氯甲基树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用HBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，得保护的五肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，收集切肽后的生长激素促分泌素粗品，并经C18高效液相柱进行分离纯化，再经冷冻干燥后，制得生长激素促分泌素精品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述以2-氯-三苯氯甲基树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用HBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，得保护的五肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，收集切肽后的生长激素促分泌素粗品的方法，包括如下步骤：

(1)Fmoc-Arg(Pbf)-树脂的制备

取2-氯-三苯氯甲基树脂，用DCM浸泡，使树脂溶胀，抽干，加入溶于DMF的Fmoc-Arg(Pbf)-OH及DIPEA，反应，再加甲醇继续32～37℃反应25～35分钟，优选30分钟，抽干，树脂依次用甲醇、DMF洗涤，获得Fmoc-Arg(Pbf)-树脂；

(2)Fmoc-Phe-Arg(Pbf)-树脂的制备

在步骤(1)的Fmoc-Arg(Pbf)-树脂中，加入重量浓度为20～30％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，依次用甲醇、DMF洗涤，抽干，加入用DMF溶解的Fmoc-Phe-OH、HBTU、HOBT和DIPEA的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Phe-Arg(Pbf)-树脂；

(3)Fmoc-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂的制备

在步骤(2)的Fmoc-Phe-Arg(Pbf)-树脂中，加入重量浓度为20～30％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，用甲醇、DMF洗涤，抽干，加入用DMF溶解的Fmoc-Trp-OH、HBTU、HOBT、DIPEA的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂；

(4)Fmoc-Ser(tBu)-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂的制备

在步骤(3)的Fmoc-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂中，加入重量浓度为20～30％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，用甲醇、DMF洗涤，抽干，加入用DMF溶解的Fmoc-Ser(tBu)-OH、HBTU、HOBT、DIPEA的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Ser(tBu)-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂；

(5)Boc-Gly-Ser(tBu)-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂的制备

在步骤(4)的Fmoc-Ser(tBu)-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂中，加入重量浓度为20～30％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，用甲醇、DMF洗涤，抽干，加入用DMF溶解的Boc-Gly-OH、HBTU、HOBT、DIPEA的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Boc-Gly-Ser(tBu)-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂；

(6)Gly-Ser-Trp-Phe-Arg的制备

在步骤(5)的Boc-Gly-Ser(tBu)-Trp-Phe-Arg(Pbf)-树脂中，加入切肽试剂，反应，减压除溶剂后，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，P₂O₅真空干燥，获得切肽后的生长激素促分泌素粗品。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，取2-氯-三苯氯甲基树脂，用DCM浸泡，使树脂溶胀，抽干，加入溶于DMF的Fmoc-Arg(Pbf)-OH及DIPEA，于32～38℃反应1～2小时，再加甲醇继续32～37℃反应25～35分钟，优选30分钟，抽干，树脂依次用甲醇、DMF洗涤，获得Fmoc-Arg(Pbf)-树脂；

所说的三苯氯甲基树脂颗粒为：85-95目，取代度为：0.8～1.2mmol/g；

DMF中，Fmoc-Arg(Pbf)-OH的含量为0.08～0.12g/ml；

DIPEA与2-氯-三苯氯甲基树脂的摩尔比为1∶5～7；

Fmoc-Arg(Pbf)-OH与2-氯-三苯氯甲基树脂的摩尔比为1∶0.9～1.1。