[发明专利]伏立诺他及其药物组合物中的杂质的高效液相色谱分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物的分析方法，特别是用高效液相色谱对伏立诺他及其药物组合物中的杂质进行检测的方法。

背景技术

由于一种药品从合成原料药到制备有关的制剂，再经贮藏、运输、使用，要经历一段较为复杂和漫长的过程，在此期间每一过程都可能产生有关的杂质，如生产中可能带入起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等；在贮藏和运输过程中可能产生降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。药品中的杂质泛指在药品的生产与储运过程中产生的工艺杂质或降解产物等。药品在临床使用中产生的不良反应除了与主成分的药理活性有关外，与药品中存在的杂质也有很大关系，药品中杂质的控制是药品研发的一个重要方面，也是临床使用安全性的保障。因此，为了保证药物的安全有效，同时也要考虑到生产实际情况，国内外在药物的研究过程中均将杂质检测作为控制药品质量的重要指标。药品杂质检测研究是目前我国药品研发中的薄弱点之一。要全面提升我国药品研发的水平、切实保证公众用药的安全性，必须重视并加强药品中有关杂质的研究。

伏立诺他(Vorinostat)分子式如下图所示，化学名称为“N-羟基-N’-苯基辛二酰胺”或“辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)”，是Merck公司开发的世界上第一个抑制组蛋白脱乙酰基酶(histone deacetylase，HDAC)的新型抗癌药物，治疗加重、持续和复发或用两种全身性用药治疗后无效的皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)。

伏立诺他

专利WO2011/061545公开了一种采用高效液相色谱分析伏立诺他含量及其杂质的方法，该法尤其适合分析采用专利WO2010/043904合成工艺制备的伏立诺他含量及其杂质。如专利WO2011/061545专利所述，采用专利WO2010/043904合成工艺制备的伏立诺他含有的主要杂质为：

(1)N，N’-二苯基-辛二酰胺：

(2)N’-苯基-辛二酰胺：

(3)7-苯基氨基甲酰基庚酸：

(4)N-羟基-N，N-二(N’-苯基辛二酰胺基)胺：

众所周知，药品中的杂质具有个性化的特征，不同的药品具有不同的杂质谱，同一药品用不同的生产工艺也可能具有不同的杂质谱。伏立诺他的合成路线较多，所涉及的起始原料及中间体均不尽相同，因此专利WO2011/061545所提供的方法不可能适用所有工艺路线制备的伏立诺他的杂质的检测。换而言之，采用不同工艺路线制备的伏立诺他均需有适合其杂质检测的方法。

本发明人也对伏立诺他的合成进行了多方面研究，确立的新的合成工艺。通过分析研究发现，采用本发明人确定的合成工艺制备的伏立诺他可能含有的杂质为：苯胺、二苯胺、7-苯基氨基甲酰基庚酸、N-羟基-N，N-二(N’-苯基辛二酰胺基)胺。因此，需要对测定条件进行探索，针对该合成工艺建立起快速、简单、并且有效、可靠的伏立诺他及其组合物中的杂质检测分析方法。

发明内容

本发明的目的是探索伏立诺他及其药物组合物中杂质的高效液相色谱分析的各种条件，提供一种快速、简单、可靠、有效的伏立诺他及其药物组合物中杂质的高效液相色谱分析方法。

本发明人在开发伏立诺他的过程中，重点研究了伏立诺他及其组合物杂质的高效液相色谱分析方法。在研究过程中发现，如若将苯胺、二苯胺、7-苯基氨基甲酰基庚酸、N-羟基-N，N-二(N’-苯基辛二酰胺基)胺四种杂质在同一色谱条件下进行检测，需要跨度较大的梯度条件，易产生复杂洗脱峰，干扰对杂质的判断。根据研究分析结果，发明人将杂质二苯胺和N-羟基-N，N-二(N’-苯基辛二酰胺基)胺按本发明技术方案进行检测。而杂质苯胺、7-苯基氨基甲酰基庚酸及伏立诺的高效液相色谱检测技术方案已经在申请号为201110278836.4的中国专利中进行了详细说明。

本发明的技术方案如下：

采用高效液相色谱法分析伏立诺他及其组合物中的杂质，其色谱条件为：

(1)色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

(2)流动相：0.05％～0.5％(v/v)磷酸缓冲溶液∶乙腈∶甲醇的体积比为36～44∶6～24∶40～50(v/v)；

其中，所述的“杂质”为二苯胺和/或N-羟基-N，N-二(N’-苯基辛二酰胺基)胺。

本技术方案检测波长优选240nm；流动相优选0.05％～0.5％(v/v)磷酸缓冲溶液∶乙腈∶甲醇优选38∶14∶48(v/v)；流动相中的磷酸缓冲溶液优选0.2％(v/v)；

(一)检测条件的选择

1.检测波长的初步选择