[发明专利]快速检测赭曲霉毒素A的可视金纳米棒试纸条及制备方法

说明书

技术领域

快速检测赭曲霉毒素A的可视金纳米棒试纸条及制备方法，涉及赭曲霉毒素A检测技术领域。

背景技术

赭曲霉毒素（Ochratoxins）是曲霉属和青霉属的几个种产生的有毒代谢产物。在寒冷的气候下，产毒霉菌主要是纯绿青霉（P.viridicatum）而在温暖的气候下，产毒霉菌主要是赭曲霉（A. Ochraceus）。赭曲霉毒素的基本化学结构是由异香豆素连接到β~苯基丙氨酸上的衍生物，有A、B、C、D四种化合物。赭曲霉毒素A（Ochratoxin A.，缩写OTA）的化学结构式为：

赭曲霉毒素B的分子结构中没有氯元素，赭曲霉毒素C是赭曲霉毒素A的乙酯，赭曲霉毒素D是4~羟基赭曲霉毒素A。从对谷物的污染率、污染水平及对人畜的毒性考虑，OTA是重要的有卫生学意义的霉菌代谢产生。OTA是稳定的无色结晶化合物，溶于极性溶剂和稀碳酸氢钠溶液，微溶于水。将OTA的乙醇溶液贮于冰箱中一年以上也无损失，但应避光保存，如接触紫外线，几天就会分解。

OTA主要污染谷物，在豆类、在动物饲料中OTA的污染率和污染水平远远超过供人食用的粮食。动物食用污染OTA的饲料，OTA蓄积于动物体内，在动物的肾、肝、肌肉和血液中都能检出OTA，人也可通过食用动物组织摄入OTA。OTA对实验动物的毒性主要表现为肾脏毒和肝脏毒，并有致畸和致癌作用。由OTA引起的天然发生的霉菌毒素病有丹麦和瑞典猪的霉菌毒素肾病，OTA也可能是巴尔干地区流行的人的地方性肾病的病因。我国对谷物，豆类及其相关制品中赭曲霉毒素A的限量为5ng/mL。

目前我国对赭曲霉毒素A残留的检测方法有薄层层析法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)等。但是仪器分析方法存在样品须经多步稀释、过滤、提取，制备复杂、繁琐的缺点。尽管HPLC-FLD方法是赭曲霉毒素A的确证方法，但是由于其操作繁琐，以及长时间的样本前处理过程，导致检测成本高，周期长，无法满足大批量样本快速筛查的要求。而免疫分析技术具有较高的灵敏度和特异性，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的检测。目前ELISA方法和胶体金免疫层析法(Colloidal Gold Irnmuno-Chromatography Assay，简称为GICA)由于其廉价，特异，灵敏和快速等特点，被广泛地使用于兽药残留的快速筛查中。但ELISA试剂需要专用的实验室和专业人员进行检验，操作，时间较长，对人员的操作能力具有较高要求。而胶体金免疫层析方法操作简便、快速、适于现场检测，但灵敏度稍低，结果用肉眼直接观察，会产生误差，而且由于产品的灵敏度所限，目前国内用于检测赭曲霉毒素A的商品化胶体金试纸条尚没有在市场销售。

金纳米棒是一种尺度从几纳米到上百纳米的棒状金纳米颗粒，具有独特的光学、光电、光热、光化学、以及分子生物学性质。金纳米棒拥有随长宽比变化，从可见(550 nm)到近红外(1550 nm)连续可调的表面等离子体共振波长，极高的表面电场强度增强效应(高至10e⁷倍)，极大的光学吸收、散射截面，以及从50%到100%连续可调的光热转换效率。

此金纳米棒快速检测试纸的基本原理基于竞争免疫反应，即样品中的赭曲霉毒素A和固定在硝酸纤维素膜上的抗原OTA-BSA竞争结合金纳米棒标记的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体。