[发明专利]检测沙丁胺醇的酶联免疫试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种沙丁胺醇酶联免疫检测试剂盒，其包括包被有包被原的酶标板、沙丁胺醇特异性抗体、酶标记物、沙丁胺醇标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、样本稀释液，所述包被原为沙丁胺醇药物抗原，所述酶标记物为酶标记抗抗体。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述沙丁胺醇药物抗原为沙丁胺醇半抗原与载体蛋白的偶联物，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、兔血清蛋白、甲状腺蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或人血清白蛋白。

3.如权利要求1-2所述的试剂盒，其特征在于：所述的沙丁胺醇半抗原的制备方法主要包括如下步骤：

(1)取1-3g沙丁胺醇，溶入20-50ml DMF中，然后加入10％摩尔当量的TEMPO和10％摩尔当量的四丁基氯化铵，20-50ml 0.5M的NaHCO₃水溶液，室温下搅拌30分钟后，加入1.1-1.5摩尔当量的NCS，室温反应2-5小时后，除去大部分溶剂，乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥，除去溶剂后柱层析纯化，得到白色固体，为沙丁胺醇单氧化物。

(2)1-2g步骤(1)所得沙丁胺醇氧化物，溶入20-30ml DMF中，加入2-5摩尔当量的乙二胺，室温至100℃反应5-20小时，除去溶剂，乙醇-水中重结晶，得到白色固体，为沙丁胺醇单氧化物的乙二胺缩合产物。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的沙丁胺醇特异性抗体为沙丁胺醇药物单克隆抗体。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶；酶标记抗抗体是采用过碘酸钠法将标记酶与抗抗体偶联得到。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述底物液A液为过氧化脲溶液，底物液B液为四甲基联苯胺溶液，所述的终止液为1～2mol/L的硫酸溶液。

8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为含1％吐温-20的0.15～0.2mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液，所述的样本稀释液为pH为7.4的0.02mol/L的磷酸盐缓冲液中吐温-20的含量为0.5％混合溶液配制而成的稀释液进行稀释。

9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述标准品溶液浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L。

10.如权利要求1-9所述的沙丁胺醇酶联免疫试剂盒检测样本中沙丁胺醇残留的方法，主要步骤包括：

1)将待测样本进行前处理，得到待测样本溶液；

2)用权利要求1-9任一项所述的酶联免疫试剂盒检测待测样本溶液；

3)分析检测结果。