[发明专利]尿液中尿酸检测免疫胶体金试纸条及制造方法

说明书

技术领域

本发明设计一种免疫胶体金试纸条，用于检测尿液中尿酸的含量。

背景技术

随着社会的进步，人们对其自身健康水平日益关注。生物分子尿酸是人体内嘌呤代谢的最终产物，分子式为C₅H₁₄N₄O₃，MW 168.11，不溶于水，也难溶于酸。尿酸是一种含有嘌呤结构的化合物，也是嘌呤的最重要衍生物。尿酸含量与体内核酸的分解代谢速度、肾的排泄功能和食物中核酸的含量有关，血或尿中尿酸含量的升高可作为诊断痛风病、慢性白血病、多发性骨髓瘤、肾功能减退和由于中毒而产生的肝脏疾病等的主要指标。因此，近年来尿酸的检测和分析在疾病的临床诊断和治疗方面的应用日益广泛。

目前已报道的尿酸测定方法重量法、滴定法、还原法和酶法等。重量法和滴定法操作繁琐，而且准确度低，不适于尿酸的精确测定。临床上通常采用还原法和酶比色法。还原法的检测原理是，尿酸在碱性条件下被磷钨酸氧化成尿素，磷钨酸被还原成钨蓝，其生成量与尿酸含量成正比。此法的检测缺点是，血样中的抗坏血酸易干扰检测效果，样品必须事先进行脱蛋白处理，需要昂贵设备和专业分析人员。酶法常用于医院的自动生化分析仪，适于大批量试样的分析作业，但是血液分析前经离心分离为血清或血浆，要求专业人员和专门的试剂，不适于家庭中使用。此外，这些方法绝大多数属血尿酸检测方法，病人样本采集有疼痛且有感染危险。

技术方案

针对上述尿酸检测技术的发展和应用现状，本发明基于抗体识别和纳米尺寸效应的免疫胶体金技术，结合试纸的廉价和便捷优势，建立一种能够便捷直观地测定尿液中尿酸含量的免疫胶体金速测试纸条。此试纸条无需仪器设备和专业操作人员，避免了取血的痛苦和可能的感染危险，检测快速现象直观，是一种非常适合病人家庭和小型医疗机构使用的高效尿液尿酸检测方法。

本发明采用以下技术方案：

一种检测尿液中尿酸的免疫胶体金试纸，包括背板及硝酸纤维素膜，尿酸-OVA抗原作为试纸检测线T线，羊抗兔抗体作为试纸质控线C线，C线与T线均喷涂于硝酸纤维素膜上，并在硝酸纤维素膜的T线侧叠加粘贴胶体金标垫，胶体金标垫和硝酸纤维素膜的C线侧分别叠加粘贴样品垫和吸收垫。

所述的胶体金标垫由特异识别尿酸的兔源抗体所修饰。

硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫及吸收垫，依次粘贴在涂有胶层的白色塑料背板上，压紧后切割成条状。

所述试纸可直接用于尿液中尿酸的检测。

所述试纸的制备方法，包括以下步骤：

(1)通过尿酸半抗原与牛血清白蛋白BSA偶联，获得尿酸-BSA人工抗原；

(2)将尿酸-BSA人工抗原免疫兔子，免疫后取兔血获得抗血清并纯化抗体，通过竞争ELISA法检测抗体对尿酸分子的特异性，得到尿酸抗体；

(3)利用胶体金标记上述尿酸抗体，制备胶体金抗体探针液，通过浸泡玻璃棉膜，得到胶体金垫；

(4)将尿酸-OVA包被抗原和羊抗兔抗体，分别喷涂于硝酸纤维素膜上；

(5)将硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫以及吸收垫，依次粘贴在涂有胶层的白色塑料背板上，压紧后切割成条状。

本发明优选以下技术方案：尿酸免疫胶体金速测试纸条(图1)，是在一块涂有胶层的塑料背板上粘贴喷有尿酸-OVA(鸡卵清蛋白)包被抗原(T线)和羊抗兔抗体(C线)的硝酸纤维素膜，并在硝酸纤维素膜的T线侧叠加粘贴特异识别尿酸兔源抗体修饰的胶体金垫，胶体金垫和硝酸纤维素膜的C线侧分别叠加粘贴样品垫和吸收垫，切割成条状。

尿液中尿酸免疫胶体金速测试纸条制造方法的全过程包括以下步骤：

1)采柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒，颗粒直径为15±3.5nm；

2)将尿酸半抗原通过水溶性碳化二亚胺(EDC)法将尿酸分子与牛血清白蛋白(BSA)偶联，获得尿酸-BSA人工抗原；所述的尿酸半抗原的特征是，在尿酸分子中一个羟基位点添加一个戊酸的改造分子；

3)将尿酸-BSA人工抗原免疫雄性新西兰大白兔，免疫后取兔血获得抗血清并纯化抗体，通过竞争ELISA法检测抗体对尿酸分子的特异性；

4)1.3mg尿酸抗体与50mL胶体金溶液混合，制备胶体金抗体探针。将玻璃棉膜浸泡与此探针溶液中，37℃干燥，得到胶体金垫；

5)采用单向喷点仪将尿酸-OVA包被抗原和羊抗兔抗体，喷在硝酸纤维素膜上，37℃干燥；

6)将硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫以及吸收垫，依次粘贴在涂有胶层的白色塑料背板上，压紧后切割成条状。

附图说明