[发明专利]一种PIK3R1基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种PIK3R1基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

磷酸肌醇3激酶，调控亚基1(phosphoinositide-3-kinase，regulatory subunit 1，p85α，PIK3R1)分布于细胞内的磷酸肌醇3激酶复合体，分子主要功能为：胰岛素受体结合、胰岛素样生长因子受体结合、磷脂酰肌醇结合、激酶等，参与细胞内信号转导级联、胰岛素受体信号转导途径、磷酸肌醇磷酸化、胰岛素样生长因子受体信号转导途径。有研究表明，PIK3R1基因是一种重要的药物疗效靶标，该基因的突变将会影响PIK3R1蛋白酶活，从而影响药物疗效。

目前，对PIK3R1基因突变进行检测和分析的方法很少，主要有直接测序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。

发明内容

本发明的目的之一是提供PIK3R1基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单项或者并行检测PIK3R1基因六种常见基因型G376R、N564D、delH450-E451、delK459、delY463-L466和M326I的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案如下：

一种PIK3R1基因突变检测液相芯片，包括有：

(A).针对PIK3R1基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对G376R位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14；针对N564D位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；针对delH450-E451位点的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18；针对delK459位点的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；针对delY463-L466位点的SEQ ID NO.21及SEQ IDNO.22；和/或针对M326I位点的SEQ ID NO.23及SEQ ID NO.24；所述tag序列选自SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.12；

(B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO.25～SEQ ID NO.36，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；

(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

优选地，所述扩增引物为针对G376R位点的SEQ ID NO.37及SEQ ID NO.38；针对N564D位点的SEQ ID NO.39及SEQ ID NO.40；针对delH450-E451、delK459、delY463-L466位点的SEQ ID NO.41及SEQ ID NO.42；和/或针对M326I位点的SEQ ID NO.43及SEQ ID NO.44。