[发明专利]一种检测番鸭小鹅瘟病免疫荧光试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测番鸭小鹅瘟病免疫荧光试剂。

背景技术

番鸭小鹅瘟病是由鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)引起一月龄以内雏番鸭以腹泻、肠粘膜脱落形成栓塞为特征的一种病毒性传染病，该病1997年以来在福建省莆田、福清等地的番鸭饲养区暴发流行，目前全国各番鸭饲养区均有发生，发病率50％-70％、病死率40％-65％，给养鸭业造成一定的经济损失。临床上该病不仅常与番鸭细小病毒病(三周病)混合感染，且常被基层兽医误诊为番鸭细小病毒病。由于抗小鹅瘟高免血清对该病具有较好的治疗效果，因此快速诊断是有效控制该病减少损失的前提。虽然已有报道以小鹅瘟单抗建立的间接免疫荧光方法，但我国至今还未见番鸭小鹅瘟病以单抗介导的直接免疫荧光诊断试剂，且至今国内尚缺乏商品化的番鸭小鹅瘟病快速诊断试剂，给临床诊断带来很大困难。因此，快速确诊该病的试剂不仅具有较好的应用价值和产业化前景，而且对有效控制该病是必不可少的。

发明内容

本发明的目的就是提供一种检测番鸭小鹅瘟病的直接免疫荧光试剂，它是通过如下技术方案来实现的：制备检测检测番鸭小鹅瘟病免疫荧光试剂是取一种来源于人工筛选的抗番鸭源鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)杂交瘤细胞株D11株(即：抗GPV杂交瘤细胞株D11株)，应用抗GPV杂交瘤细胞株D11株制备抗番鸭源鹅细小病毒单克隆抗体(即：抗GPV单克隆抗体)，然后用抗GPV单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素(FITC)制备检测番鸭小鹅瘟病免疫荧光(诊断)试剂；所述的抗GPV杂交瘤细胞株D11株，保藏在CCTCC(即：中国典型培养物保藏中心)，保藏日2011年4月15日，保藏编号：C201120。

本发明的目的还提供番鸭小鹅病免疫荧光试剂的应用。

与现有同类技术比较，具有如下优点：应用本发明的试剂建立的直接免疫荧光试验可用于临床快速诊断番鸭小鹅瘟病，也可用于鹅细小病毒(GPV)抗原在组织中的定位和GPV鉴定；直接免疫荧光检测时间短(40分钟内出结果)，特异性强(仅与GPV反应)，重复性好，准确性高(与间接免疫荧光方法的符合率为90％以上)，可用于番鸭小鹅瘟病毒病的快速诊断。

2011年委托福建省科技检索部门对本发明检索，其科技查新结论为：“委托单位福建省农业科学院畜牧兽医研究所的直接免疫荧光检测雏番鸭小鹅瘟病国内未见相关文献报道。”因此，本发明的检测番鸭小鹅瘟病的免疫荧光试剂具有创新性和实用性。

附图说明

图1为在DFA中呈荧光阳性的番鸭脾脏；

图2为在DFA中呈荧光阴性的番鸭脾脏。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明进一步说明(但不是对本发明的限制)。并通过定性或定量的实验数据证明本发明的技术方案可以实现所述的用途和/或达到预期效果。

制备检测番鸭小鹅瘟病免疫荧光试剂是取一种来源于人工筛选的抗番鸭源鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)杂交瘤细胞株D11株(即：抗GPV杂交瘤细胞株D11株)，应用抗GPV杂交瘤细胞株D11株制备抗番鸭源鹅细小病毒单克隆抗体(即：抗GPV单克隆抗体)，然后用抗GPV单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素(FITC)制备检测番鸭小鹅瘟病免疫荧光(诊断)试剂；所述的抗GPV杂交瘤细胞株D11株，保藏在CCTCC(即：中国典型培养物保藏中心)，保藏日2011年4月15日，保藏编号：C201120。

本发明的检测番鸭小鹅瘟病免疫荧光(诊断)试剂，特征在于，其制备方法是将蛋白浓度为10mg/mL抗GPV单克隆抗体以透析法对0.1mg/mL异硫氰酸荧光素粉(FITC)4℃标记24h，经sephandx G-50层析柱纯化并适当浓缩，即为番鸭小鹅瘟病免疫荧光诊断试剂。

其中：