[发明专利]从酵母中制备的小分子双链核糖核酸群及制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种从酵母中制备的小分子双链核糖核酸群的制备方法及用途。

背景技术

Toll样受体(Toll-like receptors，TLR)是参与非特异性免疫(天然免疫)的一类重要蛋白质分子，也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。TLR是单个的跨膜非催化性蛋白质，可以识别来源于微生物的具有保守结构的分子。当微生物突破机体的物理屏障，如皮肤、粘膜等时，TLR可以识别它们并激活机体产生免疫细胞应答。

目前，在哺乳动物及人类中已经发现的人TIRs家族成员有11个。根据染色体的位置、基因结构和氨基酸序列，人的TLRs受体可以分为5个亚科，即TLR2，TLR3，TLR4，TLR5和TLR9。TLR2亚科有TLR1，TLR2，TLR6和TLR10；TLR9亚科有TLR7，TLR8和TLR9；TLR3，TLR4和TLR5各自形成一个亚科。

TLR如同天然免疫的眼睛，监视与识别各种不同的疾病相关分子模式(PAMP)，是机体抵抗感染性疾病的第一道屏障。其中TLR4可以识别革兰氏阴性菌脂多糖(LPS)，还可识别宿主坏死细胞释放的热休克蛋白(heatshockproteins，HSP)，体内类肝素硫酸盐和透明质酸盐降解的多糖部分以及局部的内源性酶的级联活化反应也可激活TLR4。TLR2的配体较TLR4的广泛，包括脂蛋白，脂多肽，脂壁酸(LTA)阿拉伯甘聚糖(LAM)及酵母多糖等。TLR5可以识别鞭毛蛋白，鞭毛蛋白是目前发现的TLR5的惟一配体。具有鞭毛蛋白的L型细菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和鼠伤寒沙门菌等可被TLR5识别。TLR7识别咪喹啉家族低分子量的咪唑莫特、R848和R847等。TLR9识别细菌的CpGDNA(含有胞嘧啶-鸟嘌呤模体的未甲基化DNA片段，)，激活B细胞和APC的免疫刺激特性。

TLR3特异识别病毒复制的中间产物双链RNA，从而激活NFκB和干扰素IFNβ前体。DoyleSE等证实，抗TLR3单克隆抗体能抑制成纤维细胞IFNβ的产生。ChristopherA等证实TLR3还具有调控鼻病毒对人支气管细胞感染的能力，这也说明了TLR3在宿主抵抗活病毒中发挥重要的作用。TLR3表达于免疫细胞和某些非免疫细胞如皮肤角质化细胞、纤维母细胞和肺上皮细胞等，近年来发现人肿瘤组织中也有TLR3表达。TLR3配体双链RNA能直接激活自然杀伤细胞，增强抗原特异性CD8+T细胞应答，促进树突状细胞的抗原呈递激活。

双链RNA也能通过激活多条信号转导途径，即：诱生干扰素(IFN)、激活双链RNA激活蛋白激酶(PKR)、激活2′，5′A合成酶(2′，5′oligoadenylate synthetase)、抑制蛋白质合成、刺激前列腺素E的合成、促进白细胞的分化、促进巨噬细胞、NK细胞及特异性细胞毒T淋巴细胞的活性，诱导抗原呈递细胞产生各种细胞因子，抑制化学致突变剂的作用，恢复细胞间的接触抑制等。

从肿瘤生长和转移的的内环境而言，均依赖于丰富的血管形成，血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)可以引起肿瘤血管生成，并导致肿瘤组织的快速生长。TLR3配体双链RNA能通过刺激体内干扰素生成，发挥抗肿瘤血管生成的作用，是抑制肿瘤的生成与转移的另一个重要因素。

双链RNA作为体内干扰素(IFN)诱生剂而言经济而实惠。从植物、微生物到不同种类的动物，其细胞内的dsRNA组份都具有干扰素诱生活性。目前干扰素已经用于治疗许多慢性病毒性疾病和肿瘤，但基本上都是使用基因工程干扰素或从人的细胞组织培养中经诱生、纯化而生产的干扰素制品。前者不仅价格昂贵，而且一般只含有单一亚型，抗病毒效果不尽完全；组织细胞培养干扰素价格亦较昂贵，而且经常存在批间差别、外源性污染和纯度等问题，这些外源性干扰素反复使用还经常会出现抗干扰素抗体，从而大大降低了干扰素再使用的效果。以天然dsRNA为干扰素诱生剂直接用于机体，在体内诱生的自身干扰素是广谱的，而且双链RNA是免疫调节剂(immune modulator)，已经证实双链RNA还可诱生其他一些细胞因子。因此，双链RNA作用于机体以后的生物学活性远远超出了单纯的干扰素诱生活性，而且自身干扰素在体内不会产生抗体，因此可表现出更好的治疗效果。