[发明专利]一种纯化葫芦素E的方法无效
申请号: | 201110264837.3 | 申请日: | 2011-09-08 |
公开(公告)号: | CN102276675A | 公开(公告)日: | 2011-12-14 |
发明(设计)人: | 刘东锋;万冬梅 | 申请(专利权)人: | 南京泽朗医药科技有限公司 |
主分类号: | C07J9/00 | 分类号: | C07J9/00 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 210046 江苏省南京市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 纯化 葫芦 方法 | ||
技术领域
本发明属于天然药物化学领域,特别是涉及一种采用高速逆流色谱技术纯化葫芦素E方法。
背景技术
山芝麻又名大山麻、石秤砣,为梧桐科山芝麻属植物山芝麻Helictercs angustifolia L.,以根或全株入药,具有清热解毒、止咳的功效。用于感冒高烧,扁桃体炎,咽喉炎,腮腺炎,麻疹,咳嗽,疟疾;外用治毒蛇咬伤,外伤出血,痔疮,痈肿疔疮。
郭新东等(中山大学学报(自然科学版),2003,42(2):52-54)从山芝麻根乙醇提取物的乙酸乙酯可溶部分分离出葫芦素E、小麦黄素等化合物。
葫芦素E具有抗肿瘤、保护肝脏、增强细胞免疫和催吐等药理作用,临床用于急性和迁延性慢性肝炎、原发生性肝癌。大鼠试验表明,葫芦素E皮下注射或口服,对四氯化碳所致急性和亚急性肝损害具有明显的保护作用,使动物的肝细胞疏松变性,气球样变性和脂肪性病变的数目明显减少,病变程度大力减轻,肝小叶中央坏死区迅速修复,血清转氨酶活性明显下降,肝糖原蓄积增多。葫芦素E口服能提高机体的细胞免疫功能,且此作用与其对肝炎的疗效密切相关。葫芦素E有强烈的催吐作用,2.5mg/kg给兔口服,可致吐;由此推断其催吐作用系刺激胃粘膜,反射性引起呕吐中枢兴奋所致。葫芦素E在体内对肉瘤180(S180)和Ehrlich瘤的生长有抑制作用,5~15mg/kg剂量对前者的抑制率为40%~42%,2.5~7.5mg/kg剂量对后者的抑制率为29%~37%;体外对人体鼻咽癌(KB)细胞和Hela人体癌细胞有细胞毒活性,其ED50分别为0.01μg/ml和0.05~0.01μg/ml。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足和缺陷,提供一种纯化纯化葫芦素E方法。
为了实现上述目的,本发明的技术方案如下:
一种纯化葫芦素E的方法,其特征在于:取山芝麻药材粉碎,加7-10倍量80-90%乙醇回流提取2-3次,提取液减压回收乙醇,浓缩液用乙酸乙酯萃取,取有机层浓缩,注入高速逆流色谱仪,以氯仿-甲醇-水为溶剂系统,根据紫外检测器图谱收集目标成分,浓缩,放置过夜,析出结晶,过滤,固体物加乙醇回流溶解,放置结晶。
所述的回流温度为70-100℃。
所述的氯仿-甲醇-水溶剂系统体积比为4-6:3-5:2-4,上相为固定相,下相为流动相。
本发明优势在于:采用高速逆流色谱分离,分离过程无产品损失,制备周期短,制备量大,易操作,克服了传统填充柱分离过程中样品死吸附、工艺繁琐、重现性差的技术缺陷。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明,但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1:
取山芝麻药材粉碎,取5kg,加7倍量90%乙醇溶液,在70℃温度下回流提取3次,合并两次提取液减压回收乙醇,加适量水,放入分液漏斗,加入乙酸乙酯萃取3次,萃取液浓缩至小体积作为样品溶液,取氯仿、甲醇、水按体积比为5:3:4混合,静置分层,以上相为固定相,下相为流动相,取上相注入高速逆流色谱柱,开启高速逆流色谱仪,调整转速为700rpm,同时以10ml/min的流速泵入下相,待整个系统动态平衡后,流动相流速调节为2ml/min,注入样品溶液,紫外检测器监测,收集目标流分,减压浓缩后,放置过夜,析出结晶,过滤,固体物加乙醇回流溶解,放置结晶,滤出结晶,干燥得到葫芦素E9.6g,经HPLC检测,含量为99.1%。
实施例2:
取山芝麻药材粉碎,取5kg,加8倍量85%乙醇溶液,在80℃温度下回流提取3次,合并两次提取液减压回收乙醇,加适量水,放入分液漏斗,加入乙酸乙酯萃取3次,萃取液浓缩至小体积作为样品溶液,取氯仿、甲醇、水按体积比为6:3:4混合,静置分层,以上相为固定相,下相为流动相,取上相注入高速逆流色谱柱,开启高速逆流色谱仪,调整转速为800rpm,同时以10ml/min的流速泵入下相,待整个系统动态平衡后,流动相流速调节为3ml/min,注入样品溶液,紫外检测器监测,收集目标流分,减压浓缩后,放置过夜,析出结晶,过滤,固体物加乙醇回流溶解,放置结晶,滤出结晶,干燥得到葫芦素E6.8g,经HPLC检测,含量98.1%。
实施例3:
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