[发明专利]一种促肝细胞生长素，其制剂及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种促肝细胞生长素，还涉及其制剂和应用。

背景技术

促肝细胞生长素是从新鲜乳猪肝脏中提取的小分子量多肽类混合物，分子量在10,000左右。其药理作用主要为可刺激正常肝细胞DNA的合成，促进肝细胞再生，对损伤的肝细胞有保护作用，促进肝功能的恢复，还有调节机体的免疫功能和抗肝纤维化作用。临床上用于治疗重型肝炎、慢性活动性肝炎和肝硬化等。

目前，针对促肝细胞生长素这一生物制剂类药物，已经有很多专利和文献报道。

在专利ZL03116052.2中，公开了一种促肝细胞生长素注射液及制备方法，其中的肝细胞生长素为从乳猪中提取分离获得的一种活性蛋白质，该专利称该肝细胞生长素中的蛋白质有15种氨基酸组成，占总蛋白含量的60％以上，分子量为2.1万道尔顿。

专利ZL200610047371.0公开了一种促肝细胞生长素水针剂制剂的制备方法，其中公开了一种促肝细胞生长素溶液的制备方法，包括以下步骤：1)选材；2)组织处理；3)匀浆：低温匀浆2分钟；4)冻融：反复冻融3次；5)热变性去除大分子蛋白：升温至85℃，恒温5分钟；6)离心；7)分级超滤及病毒灭活：一级超滤收集分子量30,000Da以下的组分；二级超滤收集分子量为10,000Da以下的多肽组分，60℃保温10小时，灭活病毒。

但上述专利中并未对肝细胞生长素的成分进行进一步深入的研究和分析，发明人在专利ZL93120999.4中已经公开了一种促肝细胞生长素的组成成分，但经过发明人的深入研究，得到了一种新的、含量更高、活性更强的促肝细胞生长素。

发明内容

本发明的首要发明目的在于提供了一种促肝细胞生长素；

本发明的第二发明目的在于提供了这种促肝细胞生长素的制剂；

本发明的第三发明目的在于提供了这种促肝细胞生长素的用途。

为了实现本发明的发明目的，采用的技术方案为：

一种促肝细胞生长素，所述的促肝细胞生长素溶液采用高效液相色谱法分析，在分析条件为：流动相甲醇∶水的体积比为10∶90，色谱柱hypersil ODS 4.6×300mm(5um)，波长256nm，流速0.8ml/min，具有12个色谱组分峰，其保留时间和峰面积为：

本发明的第一优选技术方案为，优选的保留时间和峰面积为：

本发明的第二优选技术方案为，促肝细胞生长素的数均分子量为10685道尔顿，重均分子量为11350道尔顿。

本发明的第三优选技术方案为，促肝细胞生长素含有18种氨基酸，氨基酸的名称及重量百分比含量为：Asp 1.5％，Thr0.3％，Ser0.7％，Glu 3.6％，Pro 0.9％，Gly1.2％，Ala 1.2％，Cys0.2％，Val 0.9％，Met 0.5％，Ile 0.9％，Leu1.8％，Tyr 0.4％，Phr 0.9％，His 0.7％，Try 2.5％，Lys 1.5％，Arg 9.1％，总量占28.8％。其中，氨基酸的检测方法采用高效液相色谱检测。

本发明的第四优选技术方案为，促肝细胞生长素的微量元素包括Fe 7.3～7.6ug/ml，Se0.04～0.05ug/ml，Mg140.5～140.7ug/ml，Zn 14.2～14.4ug/ml，Na 33.5～33.7ug/ml，Ca 0.3～0.5ug/ml，Mn 0.6～0.7ug/ml，Co 200.1～200.3ug/ml。本发明中微量元素的检测方法通过原子吸收光谱检测。

本发明的第五优选技术方案为，促肝细胞生长素的浓度为15.0～22.5mg/ml，优选15.0～21.7mg/ml，测定方法为福林酚法。

本发明的第四优选技术方案为，促肝细胞生长素中活性组份的重量占总重量的71％～75％。其中，活性蛋白的测量方法为促肝细胞生长素通过凝胶色谱等方法分离，经7721细胞掺入培养，通过MTT法测定活性组份，并计算活性组份重量的占总质量的比例。

本发明的第五优选技术方案为，所述的促肝细胞生长素在体外促7721细胞的增殖试验中，用MTT法测定的增殖倍数为4.5～6.0。

本发明还涉及一种所述的促肝细胞生长素的制剂，所述的制剂包括冻干粉针。

本发明还对提取得到的促肝细胞生长素进一步制备成了制剂，其中包括粉针剂；