[发明专利]检测脑炎类病毒的ELISA-Array方法及其专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测脑炎类病毒的ELISA-Array方法及其专用试剂盒。

背景技术

我国是脑炎类病毒危害严重的国家，正确诊断致病菌是有效控制其传播的基础，也是进行有效治疗的关键。我国所流行的脑炎类病毒性病原体，主要包括：日本乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis virus，JEV)、蜱传脑炎病毒(Tick borne encephalitis virus，TBE)、东部马脑炎病毒(Eastern equine encephalitis virus，EEEV)、辛德比斯病毒(Sindbis Virus)、登革病毒(Dengue virus，DV)等，均为虫媒传播的病毒，其中日本乙型脑炎病毒(Japanese Encephalliis virus，JEV)、蜱传脑炎病毒(Tick borne encephalitis virus，TBE)、东部马脑炎病毒(Eastern equine encephalitis virus，EEEV)可引起严重的脑炎症状，并具有较高的致死率，辛德比斯病毒(Sindbis Virus)和登革病毒(Dengue virus，DV)的临床症状较为轻微，针对以上病原体，临床上应采取不同的治疗手段和防控措施，但以上病毒均为虫媒传播，早期均有相似的症状，因此，建立准确的早期诊断方法，对于脑炎类病毒病的防控具有重要价值。

目前已有多种可同时检测多种抗原的技术方法，包括双相凝胶电泳、蛋白芯片、质谱、液相悬浮芯片技术等。然而，由于操作复杂、成本高，这些技术难以进行临床应用。

ELISA-Array技术是一种新型检测系统，它在传统ELISA技术基础上发展而来，集合了酶联免疫分析(ELISA)和微阵列(Array)技术而形成的新一代检测技术体系。既秉承了蛋白芯片技术高通量、高平行的特点；同时该技术还保持ELISA方法的成熟、操作简便、成本低的优势，针对病原体的ELISA-Array技术检测，国内尚无其他单位研究。

该技术将各种抗体由大规模全自动点样设备以微阵列的形式排布于微孔板板孔内，可用于同时检测多种病原体，数十倍提高了ELISA检测的通量。由于每个微孔实现了一份样本的多种检测，使用中减少了临床标本和检测试剂的用量。

在操作技术上，该技术流程与传统ELISA方法基本相同，所用耗材为96孔酶联板，仪器为酶联自动洗板仪、酶联反应仪，可用排枪加样，反应过程中所用试剂也与传统ELISA相同。仅在显色和结果读取过程与传统ELISA有差异。以化学发光试剂代替了传统ELISA中所使用的TMB(或DAB)底物，从而进一步放大信号，以芯片阅读仪检测实验结果，代替了酶联检测仪。因此，使用单位可沿用大部分已有的ELISA相关仪器，且技术人员不需要很高的专业背景和复杂的操作培训，易于基层检测单位的接受和推广。

目前，国内外仅有ELISA-Array技术用于肿瘤标志物的研究报道，尚未用于传染病的检测。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测脑炎类病毒的抗体组。

本发明提供的抗体组，包括6种捕获抗体；

所述6种捕获抗体分别为抗日本乙型脑炎病毒的抗体4D5、抗蜱传脑炎病毒的抗体2B5、抗辛德比斯病毒的抗体1F1、抗登革病毒2型的抗体2B8、抗登革病毒4型的抗体4F9和抗东部马脑炎病毒的抗体4E11。

所述每种捕获抗体均以捕获抗体溶液的形式存在；

每种所述捕获抗体溶液均按照如下方法制备：将所述捕获抗体与点样液混合得到的捕获抗体溶液，所述捕获抗体在对应的所述捕获抗体溶液中的浓度为0.025mg/ml-0.2mg/ml；

所述点样液按照如下方法制备：将甘油、Triton-X100和浓度为0.01M、PH为7.2的磷酸盐缓冲液混合，得到点样液，所述甘油在所述点样液中的浓度为15％-25％(体积百分含量)，所述Triton-X100在所述点样液中的浓度为0.001％-0.006％(体积百分含量)。

所述捕获抗体2B8、4D5、2B5、4E111和1F1在对应的所述捕获抗体溶液中的浓度均为0.05mg/ml，所述捕获抗体4F9在对应的所述捕获抗体溶液中的浓度为0.1mg/ml；

所述甘油在所述点样液中的浓度为20％(体积百分含量)，所述Triton-X100在所述点样液中的浓度为0.004％(体积百分含量)。