[发明专利]一种稳定的HRP酶促化学发光底物液

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析领域，更具体地说，涉及一种以HRP为酶促反应的检测体系的化学发光底物液。

背景技术

化学分析免疫法(chemiluminescence immunoassay，CLIA)是将化学发光系统与免疫系统结合，以检测抗体或抗原，它既具有免疫反应的特异性，又具有化学发光反应的高灵敏性。其具体过程是将化学发光反应试剂(可以是化学发光试剂或催化剂等)标记抗体或抗原，标记后的抗体或抗原与待测物经过一系列的免疫反应和理化步骤，最后以检测发光强度的形式测定待测物得含量。它克服了放射性免疫(RIA)因使用放射性同位素而引起的放射性危害及污染问题；克服了荧光免疫分析(FIA)中所需仪器复杂，背景干扰大的缺点。以其高的灵敏度、低的仪器价格、使用简便、安全、无放射性污染等独特的优势，倍受人们的青睐，成为标记免疫的一个重要方向。其中以吖啶酯(AE)，碱性磷酸酶(ALP)和辣根过氧化物酶(HRP)为标记物的化学发光免疫分析为主要发展趋势。

鲁米诺是人们最早了解的化学发光化合物之一，它的发光机理与反应条件有很大关系。辣根过氧化物酶可以催化鲁米诺-过氧化氢反应。由于鲁米诺体系化学发光反应有一个决定性的氧化步骤，辣根过氧化物酶标记到抗原或抗体上时，由于蛋白质大分子的空间位阻作用，往往使氧化步骤受到抑制；鲁米诺体系化学发光反应通常需要在强碱性介质中进行，而强的碱性对酶的活性会产生一定的抑制作用，因此利用鲁米诺-过氧化氢-辣根过氧化物酶直接测定生物大分子灵敏度低。

直至八十年代中后期，人们陆续发现了某些可以大大增强酶催化鲁米诺化学发光体系发光强度的物质(这些物质被称为增强剂)才使这项技术迅速地应用到基因分析及免疫检测领域。在增强剂的存在下，鲁米诺的发光强度可被提高1000倍，而且还可以大大降低氧化剂与发光剂等单独作用时出现的“本底”发光。与原来无增强剂的体系相比，加入增强剂后组成的鲁米诺体系的灵敏度大大提高，同时可将发光时间延长至几小时。使得原来用发光仪才能检测到的瞬时发光变成了可用感光胶片就能检测的持续发光，这些重大的改进使得该体系在基因、免疫分析领域得到广泛的应用。

现在市场上的发光底物稳定性差、发光强度低、本底偏高，这些严重限制了化学发光免疫检测的应用，针对这些问题，我们对其配方进行了研究。

发明内容

本发明的目的在于克服市场上常规化学发光底物的上述缺陷，获得一种稳定的HRP酶促化学发光底物液。

本发明的技术方案是：一种稳定的HRP酶促化学发光底物液，其特征是，主要由发光剂溶液A和氧化剂溶液B组成，在使用前将发光剂溶液A和氧化剂溶液B以体积比2∶3～3∶2(最佳体积比为1∶1)混合；

所述发光溶液A含有以下组分：

所述氧化剂溶液B含有以下组分：

在上述方案的基础上，进一步优化各组分的浓度，确定最优浓度为：

A液：

B液：

所述4-(1-H-1，2，4-三氮唑)苯酚(英文名称：4-(1，2，4-Triazol-1-yl)phenol；CAS号为68337-15-5，结构式)，分子量161.16。

所述鲁米诺衍生物可以为异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼)、4-氨基己基-N-乙基异鲁诺、鲁米诺单钠盐等；所述乙二胺四乙酸二钠盐，分子式C₁₀H₁₄N₂Na₂O₈·2(H₂O)，分子量为372.23；所述过硼酸钠分子式为NaBO₃·4H₂O，分子量为153.88。

本发明的技术原理为：

上述反应产生冷光，可以被化学发光设备检测到，同时该光强与HRP(辣根过氧化物酶)成正相关，使得该检测系统广泛应用于以HRP酶促反应的化学发光检测。

本发明的有益效果是：本发明经过性能测试后，发现其具有较高的反应稳定性，反应很快达到最大发光强度，之后有一个很长时间的平台期，与市场上的发光底物液进行对比，发光强度值高、且灵敏度高。本发明应用于HRP酶促反应具有反应时间短、检测平台期长的特点，在4-8℃可稳定保存2年，可广泛应用于各种以HRP为检测目标的试剂盒中。

附图说明

图1为HRP酶促化学发光动力学曲线。

图2为灵敏度梯度曲线。