[发明专利]米糠基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合菌剂的固态发酵方法

权利要求书

1.一种以米糠为基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合饲用菌剂的固态发酵方法，其特征在于： 包括以下步骤：

1．1发酵培养基制备：选用米糠和豆粕为主要原料，按照发酵培养基配方称量，培养基成分按重量百分比组成为：米糠 85 %～95 %、豆粕 2 %～10 %、葡萄糖1 %～5 %，余量为水，使之保持物料充分润湿，无结团，并用 NaOH 溶液调节物料 pH 值 至6.0 ～ 6.5，灭菌备用;

1.2固态发酵：发酵菌种接种比例：纳豆芽孢杆菌种子液:酿酒酵母种子液按重量配比为：5～7:5～3，接种量按重量百分比为5 % ～ 10 %，发酵温度 30 ～ 37 ℃，发酵期间通入充足的无菌空气，满足菌种生长需要；在此条件下发酵，获得复合菌剂；

1.3：复合菌剂干燥、包装。

2.根据权利要求1所述的以米糠为基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合饲用菌剂的固态发酵方法，其特征在于：纳豆芽孢杆菌种子液制备方法为：斜面菌种活化传代两次，以提高菌种活力；一级种子培养：用接种针从斜面取 1 环纳豆芽孢杆菌，接入装有 30 mL 牛肉膏蛋白栋培养基的 250 mL 三角瓶中，在 37 ℃，140 r/min 的条件下振荡培养 12 ～ 16 h；生产菌种培养：纳豆芽孢杆菌菌种扩大培养以牛肉膏蛋白栋培养基，培养基按重量百分比组成为：牛肉膏0.5 %，蛋白胨 1.0 %，NaCl 0.5 %，葡萄糖 0.5 %，pH 值7.2，在 37 ℃，140 r/min 条件下振荡培养12 ～ 16 h 或通气搅拌培养 12 ～ 16 h；酵母种子液制备方法为：斜面菌种活化传代两次，以提高菌种活力；用接种针从斜面取 1 环酿酒酵母，接入装有 30 mL PDA 培养基的 250 mL三角瓶中，在28 ℃，170 r/min 的条件下振荡培养 12 ～ 16 h；酿酒酵母菌种扩大培养以马铃薯为培养基，酿酒酵母培养基按重量百分比组成为：去皮马铃薯 20 %，葡萄糖 2 %，pH 值6.0～6.5，在 28 ℃，170 r/min 条件下振荡培养 12 ～ 16 h 或通气搅拌培养 12 ～ 16 h，备用。

3.根据权利要求1所述的以米糠为基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合饲用菌剂的固态发酵方法，其特征在于：发酵培养基制备过程中灭菌方法为：采用固态发酵罐发酵，发酵培养基实罐灭菌；或采用箱式发酵，箱式发酵容器和发酵培养基单独灭菌，灭菌条件为 115 ～125 ℃/20 ～ 40 min，冷却至 30～37 ℃。

4.根据权利要求1或2或3所述的以米糠为基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合饲用菌剂的固态发酵方法，其特征在于：采用固态发酵罐发酵或箱式发酵，固态发酵罐装料量控制 50%～70%，发酵培养基实罐灭菌；箱式发酵物料厚度控制 5～12cm，箱式发酵容器需进行灭菌，发酵培养基单独灭菌。

5.根据权利要求1或2或3所述的以米糠为基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合饲用菌剂的固态发酵方法，其特征在于：固态发酵时间为4 ～6天。

6.根据权利要求3所述的以米糠为基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合饲用菌剂的固态发酵方法，其特征在于：复合饲用菌剂活菌计数方法为：纳豆芽孢杆菌的计数培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，稀释涂布后于 37 ℃ 恒温培养培养 24 ～ 36 h 后计数；酿酒酵母的计数培养基为马铃薯培养基培养基，稀释涂布后于 28 ℃ 恒温培养 24 ～ 36 h 后计数；发酵结束后，发酵产品在 45 ～ 55 ℃下真空干燥至含水量低于 10 %，包装；纳豆芽孢杆菌数和酿酒酵母菌数存活率≥ 50 %，在低温干燥下贮藏。

7.根据权利要求1或2或3所述的以米糠为基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合饲用菌剂的固态发酵方法，其特征在于：米糠原料为全脂或脱脂米糠。

8.根据权利要求1或2或3所述的以米糠为基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合饲用菌剂的固态发酵方法，其特征在于：复合菌剂活菌计数方法采用稀释平皿涂布计数法，发酵产品中纳豆芽孢杆菌数 ≥ 10⁹ cfu/g，芽孢数 ≥ 10⁹ cfu/g，酿酒酵母数≥10⁹ cfu/g，混合发酵后发酵产物中的蛋白酶活力≥ 3000 u/g；产品中可溶性蛋白含量为发酵前的 2 倍，粗蛋白含量比发酵前增加 2.0 % 以上。