[发明专利]用于检测抗生素的氨基糖苷类磷酸修饰酶及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测抗生素的氨基糖苷类磷酸修饰酶，其特征在于：在氨基糖苷类磷酸修饰酶的147-170肽段的巯基上，标记有含有或者修饰巯基的荧光基团作为荧光探针。

2.根据权利要求1所述的用于检测抗生素的氨基糖苷类磷酸修饰酶传感器，其特征在于：所述含有或者修饰巯基的荧光基团为荧光素-5-马来酰亚胺。

3.一种用于检测抗生素的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的用于检测抗生素的氨基糖苷类磷酸修饰酶、ATP和二价金属离子组成的混合溶液，混合溶液为中性，室温，弱还原环境。

4.根据权利要求3所述的用于检测抗生素的试剂盒，其特征在于：所述二价金属离子为Mg²⁺，Zn²⁺，Ca²⁺或Mn²⁺。

5.根据权利要求3所述的用于检测抗生素的试剂盒，其特征在于：所述用于检测抗生素的氨基糖苷类磷酸修饰酶的最终浓度为100～300μM，所述ATP的最终浓度为1mM，所述二价金属离子的最终浓度为1.5mM。

6.一种检测抗生素的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)在氨基糖苷类磷酸修饰酶的147-170肽段的巯基上，标记含有或者修饰巯基的荧光基团作为荧光探针；

(2)制备反应体系：将步骤(1)制得的标记有荧光基团的氨基糖苷类磷酸修饰酶与ATP和二价金属离子配置成的混合溶液，混合溶液为中性，室温，弱还原环境；

(3)将一系列不同浓度的已知氨基糖苷类抗生素样品分别加入步骤(2)制得的反应体系，根据产生的荧光信号强度不同，制定抗生素浓度和荧光强度的标准曲线；

(4)将待测样本溶液加入到步骤(2)制得的反应体系中，记录荧光信号的变化；

(5)将步骤(4)的荧光信号和步骤(3)制定的标准曲线对比，判断待测样品中氨基糖苷类抗生素的残留及定量分析。

7.根据权利要求6所述的检测抗生素的方法，其特征在于：步骤(3)中，抗生素浓度与荧光强度的标准曲线公式为：

Cx=Ix-IminImax-Imin×(Cmax-Cmin)]]>

式中：C_x为待测样品中残留的氨基糖苷类抗生素的浓度；C_max为在标准品测试中，荧光信号随抗生素浓度增大的线性区，抗生素的最大浓度；C_min为在标准品测试中，荧光信号随抗生素浓度增大的线性区，抗生素的最小浓度；I_x为含有氨基糖苷类抗生素的待测样品的荧光强度；I_max为在标准品测试中，荧光信号随抗生素浓度增大的线性区，荧光信号的最大值；I_min为在标准品测试中，荧光信号随抗生素浓度增大的线性区，荧光信号的最小值。