[发明专利]甲胎蛋白抗原表位肽及核酸及制法、重组载体及宿主细胞、杂交瘤细胞及单抗和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗原表位肽，编码所述抗原表位肽的核苷酸序列以及所述核苷酸序列的制备方法，包括所述核苷酸序列的重组载体，包括所述重组载体的重组宿主细胞，针对所述抗原表位肽的单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的单克隆抗体，以及包括上述单克隆抗体的蛋白检测的试剂盒。更具体地，本发明涉及一种甲胎蛋白的抗原表位肽，编码所述甲胎蛋白的抗原表位肽的核苷酸序列以及所述核苷酸序列的制备方法，包括所述核苷酸序列的重组载体，包括所述重组载体的重组宿主细胞，针对所述甲胎蛋白的抗原表位肽的单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的单克隆抗体，以及包括上述单克隆抗体的甲胎蛋白检测的试剂盒。

背景技术

甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)是肝细胞癌的特征性蛋白，在体内可运载不饱和脂肪酸至肝癌细胞供其吸收利用，并可抑制T淋巴细胞增殖而保护肿瘤细胞逃脱免疫监视，对维持肝肿瘤细胞生长增殖起着重要作用。甲胎蛋白在分泌释放之前可停留在肝癌细胞表面，成为肝癌细胞的重要标志物，这一特性是利用抗甲胎蛋白抗体进行肿瘤诊断和导向治疗的物质基础。

但是目前用于检测肝癌的甲胎蛋白的抗原表位肽，免疫原性弱、特异性差，因此亟需一种免疫原性强、特异性好的甲胎蛋白的抗原表位肽。

发明内容

本发明的一个目的是克服现有的甲胎蛋白的抗原表位肽免疫原性弱、特异性差的缺点，提供一种免疫原性强、特异性好的甲胎蛋白的抗原表位肽。

本发明的第二个目的是提供编码所述甲胎蛋白的抗原表位肽的核苷酸序列及其制备方法。

本发明的第三个目的是提供包括所述核苷酸序列的重组载体。

本发明的第四个目的是提供包括所述重组载体的重组宿主细胞。

本发明的第五个目的是提供针对所述抗原表位肽的单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的单克隆抗体。

本发明的第六个目的是提供包括所述甲胎蛋白的抗原表位肽和/或单克隆抗体的甲胎蛋白检测的试剂盒。

本发明的发明人付出了大量地创造性劳动，筛选得到本发明具有SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的甲胎蛋白的抗原表位肽。并且本发明的发明人意外地发现，所得甲胎蛋白的抗原表位肽具有很好的特异性并且免疫原性强。

本发明提供了一种甲胎蛋白的抗原表位肽，其中，所述抗原表位肽的氨基酸序列为

(1)SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或者

(2)SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，或者

(3)对(1)或(2)所述的氨基酸序列进行一个或几个氨基酸的缺失、添加和/或取代，但其甲胎蛋白抗原表位肽的功能不变的氨基酸序列。

本发明还提供了编码本发明所述甲胎蛋白的抗原表位肽的核苷酸序列。

本发明还提供了包括本发明所述核苷酸序列的重组载体。

本发明还提供了包括本发明所述重组载体的重组宿主细胞。

本发明还提供了针对所述抗原表位肽的单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的单克隆抗体。

本发明还提供了包括所述甲胎蛋白的抗原表位肽和/或单克隆抗体的甲胎蛋白检测的试剂盒。

本发明提供的甲胎蛋白的抗原表位肽具有免疫原性强、特异性好的的优点。包括针对所述抗原表位肽的单克隆抗体的试剂盒，对甲胎蛋白的检测限低，灵敏度高，最低检测限达0.5ng/ml。

本发明获得的针对所述抗原表位肽的单克隆抗体杂交瘤细胞分类命名为杂交瘤细胞3D5，于2011年8月31日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.5193。本发明获得的针对所述抗原表位肽的单克隆抗体杂交瘤细胞分类命名杂交瘤细胞7B11，于2011年8月31日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.5194。

附图说明

图1为大肠杆菌BL21所表达的抗原表位肽SDS-PAGE电泳图片，1为AFP-1抗原表位，2为AFP-2抗原表位肽；

图2为单克隆抗体SDS-PAGE电泳图片，1为纯化AFP-1单抗，2为纯化AFP-2单抗；

图3为AFP标准品曲线。

具体实施方式