[发明专利]一种重组细菌鞭毛蛋白衍生多肽的制备和活性鉴定方法

权利要求书

1.一种制备重组的细菌鞭毛蛋白衍生多肽(bacterial flagellin dervied peptide)-辐抗肽(FuKangTai)的方法，其特征为利用温度诱导型表达载体在原核细胞中实现重组辐抗肽的高效表达，采用柱上复性的方法在变性剂介导下实现辐抗肽的体外复性，并应用离子交换层析方法获得了纯化的辐抗肽蛋白产物，该方法包括：

(1)应用PCR的方法体外合成了辐抗肽的cDNA；

(2)将辐抗肽的cDNA克隆代温度诱导型原核表达载体中，构建辐抗肽表达载体；

(3)用辐抗肽表达载体转化感受态大肠杆菌，构建辐抗肽基因表达工程菌；

(4)30℃条件下培养基因表达工程菌，42℃条件下诱导辐抗肽表达；

(5)分离辐抗肽包涵体，用变性剂裂解辐抗肽包涵体；

(6)用DEAE阴离子交换层析实现辐抗肽的体外复性；

(7)用DEAE阴离子交换层析实现对辐抗肽的进一步纯化。

2.如权利要求1所述的方法，其特征为工程菌的诱导表达条件为菌体密度OD₆₀₀＝0.6时。

3.如权利要求1所述的方法，其特征为辐抗肽包涵体的复性剂为尿素。

4.如权利要求1和3所述的方法，其特征为辐抗肽包涵体复性剂的浓度为2M。

5.如权利要求1、3和4所述的方法，其特征为辐抗肽复性过程在DEAE阴离子交换层析柱上实现。

6.如权利要求1所述的方法，其特征为复性后的辐抗肽蛋白在DEAE阴离子交换层析柱上实现纯化。

7.如权利要求1所述的方法，其制备的辐抗肽具有以下特征：分子量约为31,000道尔顿，在体外能刺激转化有TLR5受体、NF-κB报告基因和pRL-TK载体的293T细胞中NF-κB报告基因的表达活性。