[发明专利]重叠肽作为制备皮肤试验和检测特异性细胞免疫的试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学领域，具体地，本发明涉及重叠肽作为制备皮肤试验和检测特异性细胞免疫的试剂及其应用。

背景技术

免疫是指机体免疫系统对一切异物或抗原性物质进行非特异或特异性识别和排斥清除的一种生理学功能。生物体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入生物体的抗原物质，或生物体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持生物体的健康。

细胞免疫是免疫的一个重要分支。T细胞受到抗原刺激后，增殖、分化、转化为致敏T细胞(包括辅助T细胞及效应T细胞)，当相同抗原再次进入机体的细胞中时，致敏T细胞(辅助及效应T细胞)对抗原的直接杀伤作用及致敏T细胞所释放的细胞因子的协同杀伤作用，统称为细胞免疫。由于细胞免疫在控制和清除细菌、病毒及肿瘤中起着不可忽视的作用，因此细胞免疫的监测对雨疾病的治疗、预后以及评价疫苗的有效性至关重要。

目前最常见的检测细胞免疫的方法是酶联免疫斑点法(Elispot)，其步骤包括：从样本中(或被检测人体、动物体)取血，分离淋巴细胞；体外用抗原刺激淋巴细胞；最后检测由激活的淋巴细胞所分泌的伽玛干扰素(IFN-γ)来鉴定是否存在激活的细胞免疫。总的来说，虽然酶联免疫斑点法是离体或体外研究细胞免疫的常用方法，但是该方法变异系数很大，比如：在实际操作中放入细胞数的多少、细胞培养的时间、酶底物的质量以及读点机的设定及仪器的可靠性等等，并且在实际应用时，有价格昂贵、检测所需时间长的缺点。

一个简便诊断细胞免疫的方法至关重要，由于迟发性皮肤反应的机理主要是由特异的细胞免疫所引起，因此简单的皮肤试验应可以作为诊断细胞免疫的方法。一个诊断细胞免疫的成熟可靠的皮肤试验必须证明以下几点：

(1)皮肤反应不是由于I型过敏反应所引起(如皮肤划痕试验)；

(2)皮肤反应(硬结及红肿)与伽玛干扰素(IFN-γ)酶联斑点反应相关；

(3)皮肤反应不是由免疫佐剂激活的IV型过敏反应所引起。

结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病，结核菌可能侵入人体全身各种器官。在历史上，结核病曾经夺去数亿人的生命。结核病的诊断是预防和治疗的前提手段，全球每年用于诊断结核的费用累计达到10亿美元。目前中低收入国家由于受经济能力所限，诊断结核主要靠痰涂片及胸片，在发达国家，结核菌素皮肤试验是最常用的结核诊断方法。结核菌素皮肤试验的机理是结核菌素蛋白作为抗原，使得机体产生IV型过敏反应，而IV型过敏反应是由细胞免疫所引起的。因此结核菌素皮肤试验在一定程度上代表了结核菌素特异的细胞免疫反应。然而该方法尚不完善，比如不能区分结核与卡介疫苗接种等。

另有一种依据伽玛干扰素酶联斑点试验为基础的诊断方法及试剂盒，但是价格昂贵，检测时间长且结果变异较大。

目前本领域尚缺乏经济有效的检测细胞免疫尤其是结核的试剂及方法，因此急需开发针对多种抗原的、快速有效的、用于诊断细胞免疫的试剂(盒)及皮肤试验方法。

发明内容

本发明的目的是提供重叠肽用于皮肤试验和检测特异性细胞免疫的用途及方法。

本发明的另一目的是提供一种用于检测皮肤试验和特异性细胞免疫反应的试剂(盒)。

在本发明的第一方面，提供了一种重叠肽的用途，所述重叠肽用于制备检测特异性细胞免疫的试剂。

在另一优选例中，所述检测是通过皮肤试验检测特异性细胞免疫。

在另一优选例中，所述重叠肽为一组衍生自疾病靶蛋白的短肽，且各短肽都与其前一短肽重叠5-29个氨基酸。

在另一优选例中，所述重叠肽包括的短肽覆盖了靶蛋白至少70％，较佳地90％，更加地100％的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述各短肽的长度为5-30个氨基酸，较佳地8-25个氨基酸。

在另一优选例中，所述重叠肽为重组合成或全人工合成。

在另一优选例中，所述靶蛋白为成熟蛋白。

在另一优选例中，所述的特异性细胞免疫是疾病相关的细胞免疫。

在另一优选例中，所述疾病选自：细菌相关疾病、病毒相关疾病、肿瘤相关疾病或其组合。

在另一优选例中，所述细菌选自：人结核杆菌、牛结核杆菌。

在另一优选例中，所述病毒选自：艾滋病病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、人乳头瘤病毒、疱疹病毒。

在另一优选例中，所述肿瘤选自：胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌。

在本发明的第二方面，提供了一种皮肤试验方法，包括步骤：