[发明专利]总甲状腺素(TT4)定量测定试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中总甲状腺素(Total Thyroxine，TT4)含量的试剂盒及其测试方法。

背景技术

甲状腺素或3，5，3’，5’-四碘甲腺原氨酸(T4)是一种分子量为777的甲状腺激素，在甲状腺中由与一种特殊蛋白质(甲状腺球蛋白)结合的酪氨酸碘化合成。甲状腺素(T4)是甲状腺分泌的主要激素，它本身没有活性。T4在5脱碘酶作用下转化为具有生物活性的三碘甲腺原氨酸后经过一系列的反应最终合成具有生物功能的蛋白质，从而发挥甲状腺激素的生物效应。血液循环系统甲状腺激素的水平，常常反映甲状腺的功能。测定血清中总T4含量，是判断甲状腺功能最常用的检查指标。T4增高见于甲亢、T4型甲亢、亚急性甲状腺炎、高TBG血症、甲状腺激素不敏感综合症；减低见于甲减、地方性甲状腺肿、慢性淋巴性甲状腺肿、甲亢治疗期、严重肝病、TBG降低。总T4(Total Thyroxine，TT4)的测定通常作为诊断甲状腺功能低下最好的单项指标，与TSH联合使用是目前诊断新生儿先天性甲低的唯一方法。从检测角度上来说，目前临床上用于测定TT4的方法主要有放免法、ELISA法、化学发光法等。

过去以放免为代表的总甲状腺素(TT4)测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场，目前应用较多的为酶联免疫检测技术和化学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。

磁微粒分离酶联免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，而磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗原、抗体的结合反应也在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。与传统ELISA相比具有灵敏度高，检测用时少的优点。

发明内容

本发明需要解决的技术问题在于提供一种总甲状腺素(TT4)定量测定试剂盒及其检测方法，采用该试剂盒进行TT4检测具有较高的灵敏度和特异性，和更短的获得检测结果的时间和更简便的操作方式。

本发明提供了一种总甲状腺素(TT4)的定量测定试剂盒，其包含的试剂有TT4磁分离试剂，酶反应物，反应增强剂，稀释液，校准品、质控品，清洗液浓缩液以及底物溶液。

所述的磁分离试剂含有标记有抗TT4单克隆抗体的磁性微球。

所述的酶反应物是含有碱性磷酸酶标记的TT4抗原。

所述的反应增强剂是含有Tris的缓冲液。

所述稀释液是含有BSA溶液。

所述的校准品及质控品是含有一定量的TT4抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液浓缩液是含有TWEEN-20和Proclin-300的缓冲液。

所述的底物溶液为酶促化学发光底物溶液。

本发明总甲状腺素(TT4)的定量测定试剂盒的制备方法，包括下述步骤：

第-步：磁分离试剂的制备过程

一、磁珠缓冲液配制操作步骤，配制1L：

1、称取TRIS 4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96g TWEEN-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌；

3、调节PH计测量其PH值，调PH，控制PH在7.95-8.05之间；

4、称取BSA 3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um滤器过滤；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存。

二、磁分离试剂的制备过程

1、将1.0mg辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗TT4单克隆抗体溶于PH 9.5的0.1mol/L PB缓冲液中至总体积为1ml；

2、确定辛二酸二琥珀酰亚胺酯的投入量，用移液枪吸取辛二酸二琥珀酰亚胺酯加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；

3、将步骤2抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中然后放入到高速冷冻离心机中在3000g下浓缩30min至体积为0.5ml；