[发明专利]利用铁盐分离制备畜血清免疫球蛋白粉的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物分离提取技术领域，具体涉及到一种将新鲜畜血经抗凝处理后的血清为底物且利用铁盐分离制备畜血清免疫球蛋白粉的方法。

背景技术

免疫球蛋白是对抗原刺激应答中，B淋巴细胞产生的能与相应抗原特异性的结合，产生各种免疫效应（生理效应）的一类球蛋白。服用免疫球蛋白，能够以被动免疫方式提高人体免疫力。大量研究报道了口服免疫球蛋白可以有效地预防和治疗婴幼儿及成人由大肠杆菌和轮状病毒引发的腹泻以及其它疾病。

畜血中免疫球蛋白含量很高，从中提取并生产高附加值的免疫球蛋白类保健产品，既可以充分利用我国丰富的畜血资源，实现畜血的“变废为宝”，又能够扩大免疫球蛋白产品的来源，降低其较高的价格，以便于免疫球蛋白类产品的推广，促进人民健康水平的提高。

利用畜血分离制备免疫球蛋白是一种非常有前景的生产方法，不仅生产工艺简化，生产成本降低，而且具有较高的安全性。

目前沉淀法分离动物血清蛋白方法主要有以下两种：

盐析（主要是硫酸铵）和乙醇分级沉淀，这两种方法的优点是能够利用无机盐或者乙醇加入量的改变，将不同的血清蛋白依次沉淀出来，其分离效果较好，可以实现血清蛋白的分级沉淀。但其缺点也很明显：硫酸铵沉淀法分离纯化血清蛋白时无机盐的用量很大，分离后除去硫酸铵需要花费很长的时间，而且硫酸铵很难回收，易造成浪费和污染；乙醇分级沉淀易造成蛋白质的变性，必须在低温下进行，对于操作条件要求相当严格，大量处理起来比较困难。

在工业上分离纯化蛋白质通常采用的方法是柱层析和超滤，可以采用的柱层析方法包括离子交换、亲和色谱和分子筛，这些分离手段具有分离效果好，过程温和，通常不会造成蛋白质活性损失等优点，但其成本十分昂贵，同时，对于畜血清蛋白的分离，其处理量和处理速度都是有限的。直接用超滤法处理血清，超滤膜的污染会很严重，同时就目前的技术水平而言，超滤多用于蛋白质的浓缩而不是分离。

因此，对于大规模分离纯化畜血清免疫球蛋白而言，必须寻找一种成本低廉，操作简便，安全实用的方法。

发明内容

为解决上述利用畜血制备免疫球蛋白技术存在的不足，本发明提供了一种利用铁盐分离制备畜血清免疫球蛋白粉的方法，该方法先从畜血中分离出畜血清，再利用畜血清与铁盐形成盐复合物，通过控制铁盐浓度、pH和温度来改变溶液体系中畜血清蛋白的溶解度，从而分离得到畜血清免疫球蛋白上清液，然后通过超滤脱盐和浓缩，在干燥保护剂的作用下进行喷雾干燥，得到较高纯度和活性的畜血清免疫球蛋白粉。整个方法的生产工艺操作简便，过程温和，分离效果好，安全可靠。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种利用铁盐分离制备畜血清免疫球蛋白粉的方法，该方法先从畜血中分离出畜血清，再利用畜血清与铁盐形成盐复合物，通过控制铁盐浓度、pH和温度来改变溶液体系中畜血清蛋白的溶解度，从而分离得到畜血清免疫球蛋白上清液，然后通过超滤脱盐和浓缩，在干燥保护剂的作用下进行喷雾干燥，得到较高纯度和活性的畜血清免疫球蛋白粉。概括而言该方法包括畜血清的制备、畜血清免疫球蛋白的盐提、超滤脱盐浓缩和喷雾干燥四个工艺步骤，该四个工艺步骤分述如下：

Ⅰ畜血清的制备

将经过抗凝处理的畜血放在离心机上进行离心分离，离心机转速控制在3000-5000r/min，离心时间控制在10-30min，经离心分离后得到畜血清。

Ⅱ畜血清免疫球蛋白的盐提

在畜血清中加入铁盐形成盐复合物，所述盐复合物中铁离子的浓度控制在1-100mmol/L，所述盐复合物的pH值控制在5-10，所述盐复合物在30-60℃条件下反应10-30min，然后将所述盐复合物放在离心机上进行离心分离，离心机转速控制在3000-5000r/min，离心时间控制在10-30min，经离心分离后得到。

 Ⅲ超滤脱盐浓缩

采用螺旋卷式超滤设备并以截留液全循环错流方式对畜血清免疫球蛋白上清液进行超滤脱盐浓缩，超滤脱盐浓缩时畜血清免疫球蛋白上清液的pH值应为5-10，其温度应在30-60℃之间，超滤脱盐浓缩的压力控制在0.01-0.1Mpa，浓缩倍数控制在10倍得到畜血清免疫球蛋白脱盐浓缩液。

Ⅳ畜血清免疫球蛋白的干燥