[发明专利]一种检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法

权利要求书

1.一种检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征在于该方法

基于水溶性共轭聚合物和核酸外切酶III，包括以下步骤：

a.制备可特异性结合蛋白质的双链脱氧核糖核酸荧光探针；

b.将双链脱氧核糖核酸荧光探针与脱氧核糖核酸结合蛋白进行结合；

c.用核酸外切酶III对上述复合物进行酶切；

d.在上述的反应体系中加入水溶性共轭聚合物进行荧光检测。

2.根据权利要求1所述的检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征是步骤a制备的双链脱氧核糖核酸荧光探针为两条碱基序列反向互补的单链核酸分子A和B复性后形成的双链核酸分子。

3.根据权利要求2所述的检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征在于所述的核酸分子A和B复性后形成的双链核酸分子，含有脱氧核糖核酸结合蛋白可识别并与之结合的核苷酸序列。

4.根据权利要求2所述的检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征在于所述的核酸分子A的3′端含有5个突出的核酸碱基，以便核酸外切酶III作用于双链脱氧核糖核酸探针时，能从B的3′端开始降解。

5.根据权利要求2所述的检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征在于所述的核酸分子B为5′端含有荧光素标记的核苷酸。

6.根据权利要求1所述的检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征在于所述的步骤b将标记的双链脱氧核糖核酸探针与脱氧核糖核酸结合蛋白进行结合，是脱氧核糖核酸结合蛋白与双链脱氧核糖核酸探针间发生序列特异性识别并结合的过程。

7.根据权利要求1所述的检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征在于所述的步骤c用核酸外切酶III对上述复合物进行酶切，是核酸外切酶III对核酸探针分子从双链脱氧核糖核酸的3′发生降解反应，逐个释放单核苷酸的过程。

8.根据权利要求1所述的检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征在于所述的步骤d中的水溶性共轭聚合物的发射光谱与荧光素的吸收光谱有较好的重叠，以便发生高效的荧光共振能量转移；荧光共振能量转移效率用529nm和450nm处的荧光发射强度的比值来表示，即I_529nm/I_450nm。

9.根据权利要求8所述的检测脱氧核糖核酸结合蛋白的荧光检测方法，其特征是所述的荧光发射强度，用岛津RF-5301荧光分光光度计进行检测，激发波长为404nm，发射波长扫描范围为410-650nm。