[发明专利]三角褐指藻的双层平板固体培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum，PT)的培养，尤其是涉及一种三角褐指藻的双层平板固体培养方法，以获得三角褐指藻的固体藻平板。

背景技术

溶藻微生物，诸如溶藻的细菌、放线菌、病毒、真菌和原生动物的不断发现，为赤潮的微生物防治开拓了广阔的前景，而溶藻微生物的分离是赤潮微生物防治的基础。

溶藻微生物的分离和筛选通常有两种途径：一种是通过液体感染的方式，另一种是通过固体感染的方式。液体感染的方法是通过监测藻的生长是否受抑制来判断体系中是否存在溶藻微生物，包括用普通光学显微镜观察藻细胞是否发生裂解(1.Takao，Y.，K.Nagasaki，K.Mise，T.Okuno，D.Honda，Isolation and characterization of a novel single-stranded RNA virus infectious to a marine fungoid protist，Schizochytrium sp(Thraustochytriaceae，labyrinthulea).Applied and Environmental Microbiology，2005.71(8)：4516-4522.)，或通过肉眼观察藻液颜色是否发生变化(2.Tomaru，Y.，Y. Shirai，H.Suzuki，T.Nagumo，K.Nagasaki，Isolation and characterization of a new single-stranded DNA virus infecting the cosmopolitan marine diatom Chaetoceros dehilis.Aquatic Microbial Ecology，2008.50(2)：103-112；3.Imamura，N.，I.Motoike，N.Shimada，M.Nishikori，H.Morisaki，H.Fukami，An efficient screening approach for anti-Microcystis compounds based on knowledge of aquatic microbial ecosystem.Journal of Antibiotics，2001.54(7)：582-587.)，或检测藻荧光值是否下降(4.Bettarel，Y.，J.Kan，K.Wang，K.E. Williamson，S.Cooney，S.Ribblett，F.Chen，K.E.Wommack，D.W.Coats，Isolation and preliminary characterisation of a small nuclear inclusion virus infecting the diatom Chaetoceros cf.gracilis.Aquatic Microbial Ecology，2005.40(2)：103-114；5.Su，J.Q.，X.R.Yang，T.L.Zheng，Y.Tian，N.Z.Jiao，L.Z.Cai，H.S.Hong，Isolation and characterization of a marine algicidal bacterium against the toxic dinoflagellate Alexandrium tamarense.Harmful Algae，2007.6(6)：799-810.)，来判断是否存在溶藻微生物，该方法适用于各种大小的藻类溶藻微生物的分离和筛选。但该方法存在很多缺点：例如，有时需要每天通过显微镜观察对照组和处理组的藻细胞是否裂解，工作量大，且有些藻类的细胞较小在光学显微镜下不容易判断是否裂解；有时一些非生物因素也会导致藻细胞裂解或生长受抑制，易产生假阳性结果；有时虽然体系中存在溶藻微生物但并不能明显的抑制藻的生长，易产生假阴性结果。固体感染的方法是通过肉眼观察藻平板上是否出现空斑来判断体系中是否存在溶藻微生物(6.Bellec，L.，N.Grimsley，Y.Desdevises，Isolation of Prasinoviruses of the Green Unicellular Algae Ostreococcus spp.on a Worldwide Geographical Scale.Applied and Environmental Microbiology，2010.76(1)：96-101；7.Kim，J.D.，J.Y.Kim，J.K.Park，C.G.Lee，Selective Control of the Prorocentrum minimum Harmful Algal Blooms by a Novel Algal-Lytic Bacterium Pseudoalteromonas haloplanktis AFMB-008041.Marine Biotechnology，2009.11(4)：463-472.)，仅适合能在固体培养基上生长的藻类的溶藻微生物的分离和筛选，但其相对液体感染的方法更简单、直观。