[发明专利]一种加压毛细管电色谱检测鳗鱼中磺胺类药物残留的方法

权利要求书

1.一种加压毛细管电色谱仪检测鳗鱼中磺胺类药物残留的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)样品制备：将鳗鱼肌肉组织样品剪碎后均质，冷冻保存；

2)样品预处理：将样品经乙酸乙酯离心提取，HLB固相萃取柱净化，再经0.20～0.24μm滤膜过滤后供毛细管电色谱测定用；

3)配制磺胺标准溶液；

4)采用加压毛细管电色谱进行分析：以反相键和C18为填料的毛细管电色谱柱作为检测柱；流动相采用4～6mmol/L，pH 5.5～6.5的磷酸氢二钠溶液与乙腈的混合液，其体积比为80～60∶20～40；在所加电压为9～11kv，柱压为7.5～8MP，柱温为常温，流动相的流速：40～60μL/min；进样量：0.9～1.1μL的工艺条件下，用紫外检测器在波长270nm处进行检测，同时绘制标准曲线；

5)将样品经检测分析后根据其保留时间进行定量分析，利用外标法根据其峰面积进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤2)中的乙酸乙酯离心提取的具体过程为：准确称取5±0.01g均质样品置于50mL离心管中，加入4～6g干燥的无水硫酸钠和10～20mL乙酸乙酯，用涡旋混合器充分混匀2～3min，4000～6000r/min离心8～12min，将上清液转移到100mL分液漏斗中，再向原离心管中加入10～15mL乙酸乙酯重复提取一次，合并两次上清液于分液漏斗中，加入10～20mL正己烷，振荡使其充分混合，静置，弃正己烷层，将乙酸乙酯层转移到150mL旋转蒸发瓶，25～35℃真空旋转蒸至无液体残留，用0.8～1.2mL乙腈、1.5～2.5mL体积分数为0.9～1.1％磷酸溶液溶解得到提取液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤2)中的HLB固相萃取柱净化的具体过程为：用4～6mL乙腈活化HLB固相萃取小柱，再用4～6mL去离子水冲洗小柱，转移过多的乙腈，将提取液加到小柱上，保持1.5～2.5mL/min的流速过柱，再依次用4～6mL水、2～4mL体积分数1.8～2.2％乙腈溶液淋洗小柱，最后用5～7mL 95％(体积比)乙腈水溶液洗脱固相萃取小柱，分步洗脱，收集滤液并用氮吹仪吹干，用0.9～1.1mL流动相定容。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述磺胺为磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑和磺胺二甲异噁唑的五种，所述磺胺标准溶液的配制为：称取各磺胺类标准品10.0mg±0.01g，用乙腈溶解并定容于100ml容量瓶中，配成质量浓度为100mg/L标准储备溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述磷酸氢二钠溶液为5mmol/L，pH6.0，所述流动相的配制过程为：取乙腈、重蒸水、50mmol/L磷酸二氢钠按体积比30∶60∶10的比例配制流动相，超声波脱气20～40min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述磺胺标准溶液在检测前需用流动相稀释成0.5～5μg/mL的标准工作液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述毛细管电色谱柱选用规格为EP-100-20/45-3-C₁₈，内径100μm，有效柱长20cm，填料粒径3μm ODS。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤4)的所加电压为10kv，柱压为7.8MP，柱温为常温，流动相的流速：50μL/min；进样量：1.0μL。