[发明专利]检测轮状病毒A组的组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测轮状病毒A组的组合物，其特征在于：包括下述引物：

P1：5’- GGCTTTAAAAGAGAGAATTTCC -3’，

P2：5’- AAYTGYGGTATATTCAATACCATACA -3’，其中，Y为C或T。

2.根据权利要求1所述的检测轮状病毒A组的组合物，其特征在于：所述的组合物中还包括下述探针：

Probe：5’-荧光报告基团AARGAGCTAWCCGYTAGCCAGACGG -荧光淬灭基团-3’，其中 R为A或G，Y为C或T，W为 A或T。

3.根据权利要求2所述的检测轮状病毒A组的组合物，其特征在于：其中所述荧光报告基团为FAM，所述荧光淬灭基团为Eclipse。

4.一种检测轮状病毒A组的试剂盒，其特征在于：包括病毒RNA逆转录反应体系、PCR反应体系和权利要求1-3中任一项所述的组合物。

5.根据权利要求4所述的检测轮状病毒A组的试剂盒，其特征在于：所述PCR反应体系为实时荧光PCR反应体系。

6.一种检测轮状病毒A组的方法，其特征在于：依次包括以下步骤：

提取样品中的病毒RNA；

使用权利要求1-3中所述的组合物和使用权利要求4或5所述的试剂盒，用PCR法扩增所述病毒相应核酸序列；

反应的结果进行分析：上述步骤（2）实时荧光 PCR反应的结果进行分析，得出检测结论。

7.根据权利要求6所述的检测轮状病毒A组的方法，其特征在于：所述的PCR法为实时荧光PCR法。

8.根据权利要求7所述的检测轮状病毒A组的方法，其特征在于：所述实时荧光PCR反应体系：反应体系为20μl,包括 5×PCR缓冲液4 ??l、10mmol/L dNTP 0.8??l、20??mol/L引物各0.4 ??l、10??mol/L 探针各0.4 ??l、QIAGEN逆转录酶和聚合酶混合物0.8??l、模板2ul，加灭菌水至终体系20 ??l。

9.根据权利要求6所述的检测轮状病毒A组的方法，其特征在于：所述PCR法的循环参数为： 

50℃，逆转录30min；95℃，10min; 进入循环阶段：95℃变性15s，56℃退火延伸1min，共反应40个循环，退火延伸阶段采集荧光信号。