[发明专利]绿僵菌制剂及其在防治粘虫方面的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种绿僵菌制剂，同时本发明还涉及此绿僵菌制剂在防治粘虫方面的应用，属于生物农药技术领域。

背景技术

金龟子绿僵菌是一种重要的昆虫病原真菌，对鞘翅目、鳞翅目、膜翅目、同翅目和双翅目等昆虫有侵染能力，特别是对昆虫幼虫有较好的控制作用，利用绿僵菌防治害虫已有100多年的历史，然而单独使用绿僵菌防治害虫，其防治效果不稳定、见效慢。开发金龟子绿僵菌次生代谢产物作为杀虫剂，克服其防治效果不稳定和见效慢的缺陷，对防治叶面害虫具有重要的意义。

绿僵菌素（destruxin）是昆虫病原真菌——绿僵菌在侵染过程中向寄主昆虫血腔分泌的一种环缩肽类抗生素，绿僵菌素具有显著的杀虫效果，并且具有不同于现有杀虫剂的全新作用机理，主要作用于昆虫的血淋巴免疫系统，使之丧失免疫防御能力。绿僵菌素易降解、无残留，低毒性。

粘虫，学名 Mythimna separata(Walker)鳞翅目，夜蛾科，异名Leucania separata Walker。成虫体长15～17mm，翅展36～40mm。分布于除新疆外的全国各地。 粘虫可寄生于麦、稻、粟、玉米等禾谷类粮食作物及棉花、豆类、蔬菜等16科104种以上植物。幼虫对植物叶片取食，大发生时可将作物叶片全部食光，造成严重损失。因其群聚性、迁飞性、杂食性、暴食性，成为全国性重要农业害虫。 

    化学方法是目前防治粘虫的主要方法。然而大量化学农药的使用，不但费用投入较高，而且对环境造成严重污染，同时由于用药次数的增多，使用量的增大，致使粘虫对某些杀虫剂产生了抗性。

    我国上世纪80年代进行了利用绿僵菌防治害虫的一系列研究，取得了重要进展。近年来，在沿海一些省区也开展了相关研究，使绿僵菌在害虫的可持续控制中展现出光明前景。然而，作为真菌杀虫剂的关键技术—应用绿僵菌高效产生次生代谢产物防治害虫尚未取得重大突破。

发明内容

本发明的目的是提供一种绿僵菌制剂，这种绿僵菌制剂能有效防治粘虫。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种绿僵菌制剂，所述绿僵菌制剂是通过以下方法制备的：

① 将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用PDA平板进行培养；

② 挑选平板上产孢较好的菌株，用0.04～0.06%的吐温-80制成（0.5～1）×10⁷个/mL的孢子悬液；

③ 取10～12mL孢子悬液接入至50～60mL由发酵培养基在22～35℃环境下，110～220rpm培养3～15d发酵形成的发酵液中；

④ 将接入孢子悬液的发酵液调整pH至3.0～3.5。

作为上述技术方案的优选，所述发酵培养基含有2.5～3wt%的麦芽糖，0.7～1wt%的蛋白胨，0.5～0.8wt%的葡萄糖。

作为上述技术方案的优选，在步骤④中，在调整pH之后，再用1/12～1/10体积的萃取液进行萃取，然后收集有机相并将该有机相浓缩；所述萃取液是由乙酸乙酯和二氯甲烷以体积比为1︰（1～1.2）组成的混合物。

本发明所述的绿僵菌是金龟子绿僵菌，拉丁学名为 Metarhizium anisopliae。

本发明的另一个目的是提供上述绿僵菌制剂在防治粘虫方面的应用。

本发明具有以下技术效果：

本发明提供的绿僵菌制剂在处理粘虫时具有有效的杀灭或抑制作用。

具体实施方式

本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

实施例一

一种绿僵菌制剂，它是通过以下方法制备的：

① 将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用PDA或SDAY平板进行培养；

② 挑选平板上产孢较好的菌株，用0.04%的吐温-80制成0.5×10⁷个/mL的孢子悬液；

③ 取10mL孢子悬液接入至50mL由发酵培养基在22℃环境下，110rpm培养3d发酵形成的发酵液中，所述发酵培养基含有2.5wt%的麦芽糖，0.7wt%的蛋白胨， 0.5wt%的葡萄糖；

④ 将接入孢子悬液的发酵液过滤，调整pH至3.0，用1/12体积的萃取液进行萃取，然后收集有机相并将该有机相浓缩；所述萃取液是由乙酸乙酯和二氯甲烷以体积比为1︰1组成的混合物。

实施例二