[发明专利]检测登革病毒抗体的胶体金试纸条及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种检测登革病毒抗体的胶体金试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

登革热是由登革病毒(Dengu e virus，DV)所致的一组虫媒性传染病，传播媒介主要是埃及伊蚊。感染DV后可发生登革热(Dengue fever， DF)、登革出血热(Dengu e hemorrhagic fever，DHF)、登革休克综合征(Dengue shock syndrome，DSS) 。DV有4种血清型，即DV1、2、3、4型。DV引起的感染广泛流行于全球热带和亚热带地区，特别是东南亚、西太平洋、中南美洲、非洲，发病率和病死率均较高，是最为严重的一种虫媒病毒性疾病。全球有100多个国家有该病发生，每年约5 000万人感染，50万人需入院治疗，病死率高达5%。DV感染的实验室诊断，主要有病毒分离、抗体和抗原检测、基因诊断等。WHO曾经把血凝抑制试验(H I)作为登革热的标准诊断方法。然而，病毒分离所需时间较长，达不到快速诊断的目的，而常规的血清学诊断又因存在广泛的交叉反应而受到干扰。胶体金标记的免疫层析方法具有快速、简便、不需要依赖重要装备、能够实现现场检测等特点，成为目前传染病快速诊断中研究的热点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用方便、检测快捷的检测登革病毒抗体的胶体金试纸条，本发明的另一目的是提供一种上述试纸条的制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明一种检测登革病毒抗体的胶体金试纸条，包括反应支撑物、紧密连接于反应支撑物上表面中部的硝酸纤维膜，硝酸纤维膜起始端的上表面与吸水垫部分重叠连接、硝酸纤维膜末端的上表面与金标抗体保护膜部分重叠连接，金标抗体保护膜的上表面部分重叠连接有样品垫，其中，金标抗体保护膜包括膜本体、及均匀涂布在其上的胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白（Staphylococal Protein A，SPA）或重组登革病毒E蛋白涂层，硝酸纤维膜上靠近其起始端处设置有羊抗兔IgG或羊抗重组登革病毒E蛋白IgG包被的质控条带、靠近其末端处设置有重组登革病毒E蛋白包被的检测条带。

进一步，所述反应支持物为PVC板，吸水垫为滤油纸。

进一步，所述金标抗体保护膜为玻璃纤维膜、聚脂膜或滤纸纤维。

进一步，所述样品垫为玻璃纤维膜、聚脂膜或滤纸纤维。

进一步，所述试纸条整体的外部包裹设置有外壳，该外壳上对应于所述样品垫处设置有样品孔，外壳上对应于所述质控条带、检测条带处设置有观察窗。

一种上述胶体金试纸条的制备方法，具体为：

1）         制备胶体金；

2）         利用制得的胶体金标记SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白；

3）         用隔流喷金划线机以设定喷膜速度将羊抗兔IgG或羊抗重组登革病毒E蛋白IgG喷涂到硝酸纤维膜的起始端以形成质控条带，将重组登革病毒 E蛋白喷涂到硝酸纤维膜的末端以形成检测条带；

4）         将胶体金标记的SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白均匀涂布在玻璃纤维膜上，并烘干或冷冻干燥，制成金标抗体保护膜；

5）         在反应支撑物上表面中部设置硝酸纤维膜，硝酸纤维膜起始端的上表面与吸水垫部分重叠连接，硝酸纤维膜末端的上表面与金标抗体保护膜部分重叠连接，金标抗体保护膜的上表面部分重叠连接样品垫；

6）         将步骤5）中形成的试纸切成规格大小的条，进行干燥、装壳，以形成试纸条。

进一步，所述步骤1）中制备胶体金的具体步骤为：

1） 制备HAuCl₄水溶液：磁力搅拌下加入HAuCl₄，同时加入柠檬酸三钠水溶液，颜色稳定后继续加热，冷却至室温后加纯水补足至设定值，4 ℃避光保存；

2） 用K₂CO₃调pH值为6.0-6.4；

    3） 将胶体金调至pH 6.0-6.4，用PB 稀释 SPA 至0.2 mg/ml；

4） 保持胶体金稳定。

进一步，所述步骤3）中，喷膜速度为10-100mm/s；所述重组登革病毒 E2 蛋白的加入量为0.1-5mg/ml，该重组抗原的稀释液可以为PBS；羊抗兔IgG或羊抗重组登革病毒E蛋白IgG的浓度为0.1-5 mg/ml。

进一步，将胶体金标记的SPA蛋白或重组登革病毒E蛋白的pH为6.0-6.4；所述样品垫采用含有NP 40的磷酸盐缓冲液对玻璃纤维素膜进行预处理。