[发明专利]一种超低分子肝素钠的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种超低分子肝素钠(ULMWH)的制备方法及所述超低分子肝素钠的药物应用。

背景技术

肝素是一种来自于动物的硫酸化多糖，在临床上常被作为主要的抗凝、抗血栓药物来使用。但由于使用肝素有较高的出血危险性，它的使用需要进行医务观察，并及时调整剂量，因此它的临床使用有很大的局限性。

低分子肝素是从普通肝素通过不同的方法降解得到的小分子肝素制品，具有生物利用率高、血浆半衰期长等优点，特别是其引起的出血副作用大幅降低。但低分子肝素的抗FIIa值仍旧较高，如通过专利EP0040144方法制备得到的低分子肝素的抗FIIa值在30左右，抗FXa/抗FIIa的比值在3.5～5.5。使用这类低分子肝素，虽然较普通肝素的安全性有大幅提高，但仍有一定的出血危险性。同样，在美国专利US6384021中报道了一种很低分子量肝素的合成方法，虽然得到的很低分子量肝素的分子量较低，但它的抗FXa值不超过120IU/mg，抗FXa/抗FIIa比值在15～50之间。

超低分子肝素是比低分子肝素钠平均分子量更小(通常低于3000道尔顿)，抗FIIa值更低的一类肝素衍生物。与低分子肝素相比，超低分子肝素具抗凝作用安全，其抗血栓作用强，皮下注射易吸收，主要用于血栓栓塞性疾病的预防，如肾病综合症，手术后静脉血栓的形成、老年静脉血栓和心脑血管疾病的预防以及防治高血脂症等。中国专利CN200810020765报道了超低分子肝素的一种制备方法，但利用这种制备方法得到的超低分子肝素抗FXa活性低，难以满足临床要求，且工业化生产的可行性不高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种超低分子肝素钠的制备方法，该制备方法降解条件温和可减少磺酸基从肝素上的脱落，通过该方法制备的超低分子肝素钠平均分子量小于3000Da，具有高抗Fxa生物活性。

为解决以上技术问题，本发明一种超低分子肝素钠的制备方法，包括如下步骤：

(1)取精品肝素配成10％的水溶液，室温下边搅拌边加入季铵盐如苄索氯铵，1～2小时后停止搅拌，沉降、倾倒、洗涤沉淀物，最后过滤、干燥，得到白色肝素季铵盐固体；

(2)将(1)中的肝素季铵盐固体溶解于有机溶剂(无水二氯甲烷)中配成5％～10％的溶液，加入与肝素季铵盐等量的氯化苄，30℃～35℃下，搅拌反应24小时后，冷至室温，加入2倍体积的10％醋酸钠/甲醇溶液，搅拌30分钟后，静止沉淀，过滤，甲醇洗涤，室温下真空干燥，得到肝素的酯化物；

(3)将(2)得到的肝素酯化物溶于10倍的水中配成溶液，将2.3～2.5倍的酯化物量的苄索氯铵溶于10倍的水中，完全溶解后，室温、剧烈搅拌下将此溶液慢慢加入到肝素酯化物的水溶液中；添加完成后，继续搅拌1-2小时，然后停止搅拌；待白色固体沉降后，倾去上层清夜，加水洗涤，过滤，再洗涤，然后真空下干燥(不高于50℃)，得到肝素酯化物的季铵盐；

(4)将(3)得到的肝素酯化物的季铵盐溶于10倍的干燥的二氯甲烷中，待溶解后，加入0.05～0.5摩尔浓度的有机碱如苄基三甲基氢氧化铵、在温度为30℃～35℃下反应4～24小时(优选8～12小时)进行β-消除降解；

(5)将(4)反应结束后的降解物，在室温下加入两倍体积的10％的醋酸钠的甲醇溶液，搅拌1～2小时后，在0℃～4℃下沉降、过滤、甲醇洗涤，在25℃～35℃下真空干燥，得到超低分子肝素钠的粗品；

(6)上述(5)中的超低分子肝素钠粗品配成10％的溶液，0℃～4℃下加入氢氧化钠溶液，调pH在9～10，并在此温度下反应3小时；而后用1M盐酸中和，加入氯化钠至盐度为8～10％，用5倍的甲醇沉淀，沉淀物用甲醇洗涤，真空干燥；

(7)上述(6)中的低分子肝素钠粗品配成10％的溶液，1M氢氧化钠溶液，调pH值为9～10，加入30％的过氧化氢室温搅拌6小时后，滴加1M的盐酸至中性，然后加入8～10％的氯化钠，再用5倍的甲醇沉淀超低分子肝素钠；过滤，用甲醇洗涤后干燥制得低分子肝素钠的精品；

(8)将上述(7)得到的产物溶于水配成10％的溶液后，添加氯化钠至浓度为10％，用5倍体积的甲醇沉淀，过滤，甲醇洗涤，真空干燥得到超低分子肝素钠精品；