[发明专利]一种肠毒性大肠杆菌蛋黄抗体粉的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋黄抗体，具体涉及一种从鸡蛋中提取纯化的肠毒性大肠杆菌蛋黄抗体粉剂的制备方法及其应用。

背景技术

蛋黄抗体是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，当禽类机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体（主要是IgG）在卵细胞中逐渐蓄积，形成蛋黄抗体。由于卵细胞受体的作用，禽蛋黄中存在的抗体含量与血清相似甚至更高，但一直未引起足够的重视。

在兽医领域，人们长期以来是从动物（如兔、鸡、牛、猪、羊、小鼠、大鼠、豚鼠等）的血清、初乳或单克隆抗体分离IgG。近十几年来，国内外学者就卵黄抗体的研究和开发做了很多工作，证明了免疫鸡的蛋是提供特异性IgG抗体既方便又廉价的来源。

肠毒性大肠杆菌（ETEC）蛋黄抗体是将K88、K99、987P的大肠杆菌抗原免疫产蛋母鸡后，使血清产生相应抗体，产蛋母鸡又以产蛋方式将含有抗大肠杆菌K88、K99、987P的高效价血清免疫球蛋白（IgG）有效地转移到蛋黄中，即免疫球蛋白，简称IgY，再采用理化方法从高免鸡蛋中提取纯化IgY，即肠毒性大肠杆菌蛋黄抗体粉。

肠毒性大肠杆菌蛋黄抗体粉作为特异抗体IgY的来源有许多优点。如：母鸡易于饲养，费用不高；收集鸡蛋方便，无需抽动物血，无损伤，符合现代动物保护规则；产生有效免疫反应所需抗原量小，尤其是高度保守的哺乳动物蛋白质对种系发生学上距离较远的禽类通常有较强的免疫原性。

畜禽产品的安全与饲料密切相关。研究表明，饲料中长期添加抗生素、化学合成药物，会造成畜产品中药物残留超标，污染环境，产生抗药性，从而危害人类健康。因此，研制开发环保型饲料添加剂、生产绿色动物食品，已成为国内外饲料科学领域的研究热点。蛋黄抗体可提高早期断奶仔猪的采食量、日增重，促进仔猪生长，改进断奶仔猪的饲料转化效率，减少腹泻和死亡率，降低乳猪断奶综合症的发生，提高经济效益，因而在提倡健康养殖和保护动物健康，保障畜禽产品安全，保障人类健康的今天，蛋黄抗体具有良好的开发和应用前景。

本发明通过饲养试验，人工接种肠毒性大肠杆菌抗原自制抗大肠杆菌蛋黄抗体粉，用于防治仔猪腹泻具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明目的在于，提供一种安全环保型的大肠杆菌蛋黄抗体粉，另一目的在于提供一种大肠杆菌蛋黄抗体粉的制备方法及其应用，这种大肠杆菌蛋黄抗体可用于防治仔猪腹泻，提高早期断奶仔猪生产性能，克服了粗制蛋黄抗体的缺点，更加安全、有效、使用方便。

本发明是通过以下技术途径来实现的：

一种肠毒性大肠杆菌蛋黄抗体粉的制备方法，包括以下步骤：

选择健康商品蛋鸡，以仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗为抗原免疫蛋鸡，肌肉注射0.5-2ml/羽，获得特异性IgY，首次免疫50d后可开始收集鸡蛋制备大肠杆菌蛋黄抗体粉，其后每隔40d再加强免疫一次，即可得到持续高效价IgY的鸡蛋。采用喷雾干燥技术将新鲜卵黄浆在数秒钟内迅速脱水干燥成大肠杆菌蛋黄抗体粉，喷雾干燥温度应控制在进口温度120℃-155℃、出口温度60℃-80℃之间，在干燥塔内存留2-3h。在加工过程中应及时清理附积在机器干燥塔内的粉末，以保证大肠杆菌蛋黄抗体粉的高效价、高生产效率和低生产成本。

其中，本发明所涉及到的仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗由哈药集团生物疫苗有限公司提供，并且仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗的名称还可以是其他类似的名称，例如也叫仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗。为了简化，本发明将仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗简称为猪ETEC三联苗。

仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗也被下列文献报道：《黑龙江畜牧兽医》 2011年04期 加入收藏 获取最新 提高仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗抗原单位的试验尹尧、礼颖。摘要：正仔猪大肠杆菌病病原为产肠毒素大肠杆菌,该菌致病力主要由粘附素性菌毛和肠毒素两类毒力因子构成,主要危害1周龄内的仔猪。仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗用分别带有K88、K99、987P纤毛抗原的大肠埃希菌,接种于适宜培养基上培养,将培养物。作者单位：哈药集团生物疫苗有限公司。

喷雾干燥技术工作原理：空气通过过滤器和加热器，进入干燥塔顶部的空气分配器，然后呈螺旋状均匀地进入干燥塔。料液由料液槽经过过滤器由泵送至干燥塔顶的离心雾化器，使料液喷成极小的雾状液滴，料液与热空气并流接触，水分迅速蒸发，在极短的时间内干燥，进行打包即为成品。

本发明具体的技术方案为：