[发明专利]一种幽门螺旋杆菌快速检测装置

说明书

技术领域

本发明是一种利用颜色颗粒免疫方法来检测幽门螺旋杆菌的试纸。

背景技术

幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,Hp）是人类最常见的消化道致病菌之一，我国普通人群的感染率为50%—80%，并仍以每年1%—2%的速度增长。幽门螺旋杆菌感染不但与B型胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系，而且与非溃疡性消化不良、MALT淋巴瘤和胃癌也有重要关系，故已被世界卫生组织国际癌症研究机构列入第一类致癌原。

目前公认的细菌培养、呼气试验（UBT）、组织染色等检测方法，虽具有高敏感与特异性，可作为Hp感染诊断标准，上述方法痛苦大、所需仪器昂贵、操作步骤繁琐费时、需要专业人员。幽门螺旋杆菌在微需氧环境下生长，培养条件要求高，不易存活，对细菌培养做临床诊断造成很大困难，不易推广。而呼气试验对患者和医务人员以及周围环境的污染尚未解决。

利用免疫学方法对于幽门螺旋杆菌的检测有两种途径，一是检测抗体，二是检测抗原。检测抗体需要血清作为检测样品，检测抗原非创伤性方法则可以通过检测粪便抗原作为检测的手段。现已有很多文献对幽门螺旋杆菌粪便抗原进行报道，检测粪便抗原同样具有临床检测意义和价值，可作为临床诊断依据及治疗效果观察。ELISA法检测粪便抗原有较高特异性和敏感性被临床认可，但需专业人员和仪器，操作时间长，成本高，试剂盒需要冷藏，运输不便。中国专利01223042幽门螺旋杆菌抗原快速检测盒，而该专利说明书中第3页第10行所述是用多克隆Hp抗体作为固相捕获抗体和检测抗体，多克隆抗体通常具有交叉反应性，在特异性上表现较差。

根据现有研究，细胞毒素相关蛋白（CagA）阳性Hp为毒力菌株，与萎缩性胃炎、胃癌与消化道溃疡等常见的消化道疾病密切相关，90%以上的幽门螺旋杆菌临床分离菌株CagA呈阳性表达。因此，本发明采用抗CagA的单克隆抗体，利用颜色颗粒免疫方法来实现对粪便抗原的检测，此方法特异性强，灵敏度高，成本低，操作简便，便于贮存及运输。

发明内容

本发明克服了现有技术中存在的缺点，提供了一种幽门螺旋杆菌快速检测装置，采用抗CagA的单克隆抗体、用双抗夹心法原理制成，是利用Hp单克隆抗体作为固相捕获抗体和检测抗体。单克隆抗体具有特异性强，灵敏度高，批间差小等特点。

为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明包括幽门螺旋杆菌配对单抗的建立、包含该单抗的检测试纸及检测装置。

建立幽门螺旋杆菌配对单抗，采用处理过的重组CagA接种于小鼠进行免疫，用SP20细胞融合建立瘤株进行筛选，取瘤细胞注射于BALB/c小鼠腹腔，使其产生腹水。提取小鼠腹水纯化筛选，最终筛选出两株具有较强特异性配对Hp单抗，记为Hp-1及Hp-2。

 配对单克隆抗体由胶体金标记后应用于检测试纸，胶体金是颜色颗粒中金属胶体颗粒的一种，本发明所涉及的方法及装置除采用胶体金颗粒标记抗体，也可采用其它同类颜色颗粒标记，即可以是一种金属胶体颗粒、一种标记颗粒，包括但不仅限于胶体银颗粒、铁颗粒、磁性颗粒、染料颗粒、乳胶颗粒、荧光颗粒。

利用胶体金免疫层析法制成检测试纸，通过以下方法实现：检测试纸是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、幽门螺旋杆菌单克隆抗体金标垫、样品吸液层、Max线组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条试验线和一条多克隆抗体控制线，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和幽门螺旋杆菌单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在幽门螺旋杆菌单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层；样品吸液层由三层材料叠加组成，第一层为一定规格无纺布层、第二层为玻璃纤维层、第三层为一定规格无纺布层，上述物质均需经过表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后备用，上述装置除有毛细管作用原理外，还有虹吸作用原理，大大加快吸水移动速度。按公知技术将底板、吸水板、硝酸纤维素膜及单抗金标垫垫进行组装。

检测试纸利用免疫双抗夹心法制成，将幽门螺旋杆菌配对单抗应用于检测试纸，Hp-1用于包被试验线，另一株Hp-2单克隆抗体用于胶体金标记。控制线是由羊抗鼠多克隆抗体包被而成，当样品通过胶体金标记的幽门螺旋杆菌单克隆抗体移动至羊抗鼠多克隆抗体控制线时，控制线便显色。

可以将上述检测试纸样品吸液层端直接插入待测样品中检测（样品液不得超过试纸Max线），还可以制成检测装置进行检测。