[发明专利]一种从低温乙醇法组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中回收白蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明属于血液制品技术领域，涉及一种从低温乙醇法组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中提取回收白蛋白的方法。

背景技术

从血浆中提取白蛋白的分离提取工艺目前国内外主要采用基于Cohn6法的低温乙醇法来进行，该方法是根据血浆蛋白理化性质的差别，加入不同浓度的盐、有机溶剂和酸碱，通过改变影响蛋白质稳定性的条件而分别沉淀提取出不同的蛋白质。

在低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素主要有5个，即pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度。通过控制这些参数可以逐级沉淀血浆中的不同蛋白质成份，一般先从血浆中沉淀出组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ，然后沉淀出组份Ⅳ，最终从组份Ⅴ中获得白蛋白制品。

然而分级沉淀过程中往往伴随着白蛋白的大量损失，一般夹杂白蛋白最多的是组份Ⅳ沉淀，同时组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中也含有部分白蛋白，因此从组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ中回收白蛋白是提高白蛋白提取率的重要措施，现有技术中一般采用改变沉淀条件并结合柱层析的方法，但是，该传统回收方法存在层析柱的处理量小、离心分离固液设备投资较大和能耗较高的缺点。在提取过程中对该组份只针对丙种球蛋白进行进行了提取，但在FⅡ上清中仍然含有较多的白蛋白，影响了提取效率。

发明内容

本发明的目的是提供一种用低温乙醇法从组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中回收白蛋白的生产工艺，解决了现有技术中存在的白蛋白提取率不高的问题。

本发明所采用的技术方案是：

（1）F1上清液的制备

用5～6倍体积的注射用水溶解组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，在1～5℃下搅拌3～5小时令其完全溶解后，加入磷酸二氢钠至0.01mol/L，之后再用0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至5.00±0.05，缓慢加入体积分数为95%的乙醇令溶液中乙醇体积浓度达到7.5～8.5%，并控制溶液温度在-2.5～-2℃之间，使其产生F1沉淀；待F1沉淀产生完全后加入珍珠岩至3.0±0.2g/L，硅藻土3.0±0.2g/L，继续搅拌使液体呈浆状，压滤分离出体系中产生的FⅠ沉淀，得FⅠ上清液；

（2）FⅢ上清液的制备

将上步FⅠ上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至5.15±0.05，继续添加乙醇至体积浓度13.5～14.5%，控制液体温度在-4～-3.5℃使其产生FⅢ沉淀；待FⅢ沉淀产生完全后加入珍珠岩至3.0±0.2g/L，硅藻土3.0±0.2g/L，继续搅拌使液体呈浆状；在2.0～2.8bar压力下过滤分离出体系中产生的FⅢ沉淀，得FⅢ上清液；

（3）粗白蛋白溶液的制备

将FⅢ上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至6.9～7.0，加入氯化钠至浓度5.0±0.2g/L，缓慢添加乙醇至体积浓度17.5～18.5%，控制体系温度在-5.0±0.1℃，产生FⅡ沉淀，向液体中添加珍珠岩至1.0±0.2g/L，经压滤分离出FⅡ沉淀，FⅡ上清滤过液经超滤浓缩至蛋白质浓度≥18%，得到粗白蛋白溶液；

（4）FⅢ沉淀白蛋白的提取

将第（2）步的FⅢ沉淀用800～1000升温度在5℃以下的注射用水溶解，搅拌令其完全溶解后加入氯化钠至8～9g/L和枸橼酸钠至2～3g/L；将该溶液与第（4）步的粗白蛋白溶液混合，继续添加氯化钠至7±0.5g/L，枸橼酸钠4±0.5g/L；用0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH至5.25±0.05，缓慢添加体积分数为95%的乙醇至体积浓度20%，同时降温至-4.5±0.5℃，压滤去除FⅢ沉淀，保留FⅢ上清滤液；

（5）Ⅴ沉淀的制备

用0.2 mol/L的氢氧化钠调节FⅢ上清至pH6.3±0.1，保持温度在-4.5±0.5℃，缓慢添加乙醇至乙醇浓度38%；

压滤后得FⅢ-1上清滤液，调节pH至5.75±0.05，降温至-5.5±0.5℃，并添加乙醇至浓度40%；

再次压滤后得FⅢ-2上清滤液，调节pH至4.80±0.05，继续降温至-8.0±0.1℃，压滤后获得组份Ⅴ沉淀；

（6）蛋白质溶液除杂

将组份Ⅴ沉淀用6～7倍体积的注射用水溶解，调pH4.6±0.1，保持温度在-3～-2℃，缓慢添加乙醇至体积浓度12～14%，将溶液经深层过滤去除杂质；调节滤过液pH值至5.20±0.05，经离子交换层析去除溶液中的杂蛋白；流出液用1mol/L的碳酸氢钠调节pH7.1±0.1，添加氯化钠至9±0.1g/L；得蛋白质溶液；

（7）制备白蛋白制品