[发明专利]用于检测小鼠腺病毒的引物、探针及其方法

权利要求书

1.用于检测小鼠腺病毒的引物，其特征在于，所述引物是由具有序列表中的SEQ ID NO：1的上游引物与具有序列表中的SEQ ID NO：2的下游引物组成的一对寡核苷酸。

2.一种与权利要求1所述引物配合使用的探针，其特征在于，所述探针具有序列表中的SEQ ID NO：3的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针5’端连接有荧光报告基团，3’端连接有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求2或3所述的探针，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、JOE、HEX中的任意一种，所述荧光淬灭基团选自TAMRA或Eclipse。

5.根据权利要求2-4任一所述的探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM，所述荧光淬灭基团为TAMRA。

6.一种用于检测小鼠腺病毒的方法，其特征在于，所述方法以样品DNA为模板，使用权利要求1中所述的引物及权利要求2-4任一所述的探针进行的实时荧光定量PCR检测方法。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应体系还包括腺病毒核酸PCR扩增试剂、阳性定量标准品、阴性质控品、空白对照。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的退火温度为60℃。

9.根据权利要求6-8任一所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应条件为：50℃，2min；95℃，10min；95℃，15s，60℃，1min，共40个循环。

10.根据权利要求6-9任一所述的方法，其特征在于，所述方法还包括标准曲线的建立，方法为：用含序列表中SEQ ID NO：4所示的碱基同源序列的pMD18-T重组质粒作为阳性定量标准品，将其十倍稀释成不同浓度的阳性定量标准品，以所述阳性定量标准品作为模板进行实时荧光定量PCR检测，得到检测小鼠腺病毒的标准曲线。

11.一种检测小鼠腺病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1中所述的引物及权利要求2-4任一所述的探针。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系还包括腺病毒核酸PCR扩增试剂、阳性定量标准品、阴性质控品、空白对照。

13.根据权利要求11或12所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂为2×Taqman PCR Mix。

14.根据权利要求11-13任一所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性定量标准品为含序列表中SEQ ID NO：4所示的碱基同源序列的pMD18-T重组质粒。

15.权利要求1中所述的引物或权利要求2-4任一所述的探针在检测鼠源生物制品中腺病毒残留时的应用。