[发明专利]一种降解玉米赤霉烯酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物脱毒技术领域，具体涉及一种降解玉米赤霉烯酮的方法，即用黑曲霉的发酵产物来降解玉米赤霉烯酮。

背景技术

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，简称ZEN)，是由镰刀菌属(Fusarium)的产毒菌，如禾谷镰刀菌(F.graminearum)和三线镰刀菌(F.tricinctum)等代谢生产的有毒物质，广泛存在于霉变的玉米、高粱、小麦、燕麦、大麦等谷类作物以及奶制品中。玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，主要作用于生殖系统，可使家畜、家禽和实验小鼠产生雌性激素亢进症，妊娠期的动物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产、死胎和畸胎等危害。而饲料和食品生产中所用的谷物(如玉米、小麦)是玉米赤霉烯酮产生的最好基质。2009年奥特奇对我国的谷物原料的调查报告显示，玉米赤霉烯酮的检出率为88.7％，最大值达到7772.3ppb，远远超出了我国饲料的限量标准。因此，一方面要预防玉米赤霉烯酮产毒菌感染谷物，另一方面还要探索如何通过生物学方法来降解去除谷物中已有的玉米赤霉烯酮，使这些谷物还可用于其它的领域，产生一定经济价值。

目前，已有一些利用酵母菌、粉红黏帚霉及根霉、毛霉的发酵产物来降解玉米赤霉烯酮的研究报道(Orsolya Molnar，Systematic and Applied Microbi ology，2004，27(6)：661～671；Jan U，Applied and Environmental Microbiology，2007，73(2)：637～642)。同时，关于酶降解玉米赤霉烯酮的报道也不少，例如螺旋聚孢属中的Clonostachysrosea可将玉米赤霉烯酮转化为另一种毒性较低的化合物，而其中起作用的是一种水解酶(Naoko Takahashi Ando，Biochem J.，2002，Jul y 365(7)：1-6)。但目前尚未见关于黑曲霉发酵产物降解玉米赤霉烯酮的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种黑曲霉的发酵产物在降解玉米赤霉烯酮(以下简称ZEN)中的应用。通过在体外模拟动物胃肠道环境下测定黑曲霉的发酵产物对ZEN标准品和发霉玉米中ZEN的降解效果，确定黑曲霉的发酵产物对ZEN的降解条件，为进一步开发ZEN生物解毒剂奠定了基础。

申请人在本发明利用黑曲霉的发酵产物来降解玉米赤霉烯酮。

所述的黑曲霉可选用购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，分类命名为黑曲霉(Aspergillus niger)，保藏号：CGMCC 3.316。

所述的黑曲霉发酵产物为发酵液干粉。

黑曲霉的发酵液干粉对发霉谷物中的玉米赤霉烯酮进行降解。

本发明的降解玉米赤霉烯酮的方法，优选的黑曲霉发酵液干粉添加量的重量百分比为0.2％，在37℃、pH2.0条件下降解1.5h；或是发酵液干粉添加量的重量百分比为0.2％，在37℃、pH6.5条件下降解3.0h。

本发明应用黑曲霉的发酵产物对玉米赤霉烯酮进行降解，可以有效地降解发霉谷物中的玉米赤霉烯酮，从而恢复发霉谷物的应用价值。同时本发明通过在体外模拟胃肠道环境下测定黑曲霉发酵产物对ZEN的降解效果，摸索出黑曲霉发酵产物对ZEN的最佳降解条件，为进一步将其开发为生物解毒剂，用于谷物和饲料中ZEN的降解提供了坚实的基础。

具体实施方式

本发明所应用的试剂可以应用任一款市售产品，例如玉米赤霉烯酮(ZEN)的标准品购于sigma公司，ZEN高灵敏度检测试剂盒Zearalenone Veratox购自英国NEOGEN公司。所用到的缓冲液的配制方法如下：

1、pH6.5的PBS：KCl：0.2g  KH₂PO4：0.204g  Na₂HPO₄·2H₂O：1.442gNaCl：8.066g溶解于1000ml蒸馏水中，调节pH值为6.5；

2、pH2.0的PBS：KCl：0.2g  KH₂PO₄：0.204g  Na₂HPO₄·2H₂O：1.442gNaCl：8.066g溶解于1000ml蒸馏水中，调节pH值为2.0；

3、胃蛋白酶溶液液：准确称取胃蛋白酶(1∶10000)1.333g，溶于10ml pH2.0的PBS溶液中，充分搅拌使其完全溶解；