[发明专利]一种植物内生真菌球毛壳菌株、微生物菌剂及其应用

说明书

技术领域

本发明属于农业微生物领域，涉及的球毛壳(Chaetomium globosum)ND35菌株是一种具有多机制和广谱性抑制植物病原菌以及促进植物生长能力的植物内生真菌菌株，可用于研发具有防治多种植物病害的生物杀菌剂产品和促进植物生长的多功能生物菌肥产品。 

背景技术

利用微生物活体菌剂防治植物病害是传统的生防技术之一，目前商品化的生防真菌主要是木霉菌等。虽然在生产上应用取得了一定的效果，但田间应用往往由于各种环境因素的影响而导致防病效果不稳定。其中主要原因是木霉菌的孢子粉制剂为其无性型分生孢子，容易失去活力，货架期较短，严重影响田间的生防效果。寻找生活力强、货架期长且具有生防机制多样性的新型高效生防菌株是当务之急。 

毛壳属真菌(Chaetomium spp.)是子囊菌重要属之一，球毛壳(CC.globosum)、螺卷毛壳(C.cochliodes)、绳生毛壳(C.funicola)和铜毛壳(C.cupreum)等能产生毛壳素、球毛壳素等多种抗生素，具有抗真菌和细菌活性(Brewer et al.，1972；Di Pietro et al.，1992；Aggarwal et al.，2004)。用毛壳处理种子或植物，可促进植物生长并获得高产。能抑制20多属的植物病原真菌，包括引起农作物种子腐烂和种苗猝倒的腐霉菌、立枯丝核菌、镰刀菌和引起蔬菜和大田作物以及林木、果树病害的灰霉病菌、瓜果腐霉、辣椒疫霉、小麦颖枯病菌、大麦白粉病菌、稻瘟病菌、甘蔗红腐病菌、玉米弯孢叶斑病菌、杨树腐烂病菌、苹果树腐烂病菌、苹果炭疽病菌等。在国外，已经用于苹果黑星病、欧洲赤松幼苗猝倒病等病害的田间生物防治试 验(Cullen et al.，1984；)。 

植物内生真菌是生活在植物体内，而不引起明显侵染症状的微生物。它们与植物长期协同进化是互惠共生的关系。已有的研究表明，在没有菌根真菌存在的环境中，内生真菌可以起到替代菌根真菌的促生防病作用。分离自健康毛白杨的内生真菌球毛壳ND35菌株是一个经过多年筛选研究得到的优良生防菌株。该菌株经诱导产生的粗酶液和抗生物质粗提液均能明显抑制多种植物病原真菌菌丝的生长和孢子萌发。扫描和透射电镜观察到，ND35能缠绕、侵入立枯丝核菌菌丝内部，降解细胞质。免疫细胞化学标记证明，几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶在重寄生过程中起重要作用(Gao et al.，2005)。另外，球毛壳ND35菌株还能对杨树、核桃、板栗、番茄、黄瓜等植物的生长发育有明显的促进作用。毛壳菌在自然界广泛分布，具有广谱拮抗性和较强抗逆性。子囊孢子寿命长，对干燥、低温等不良环境的抵抗力强。子囊孢子在空气中干燥2.5年，萌发率仍大于90％(刘晓光等，1999)。这一特性为延长活菌剂型生防产品的货架期提供了保证。因而，毛壳菌是一种理想的生防益菌。 

发明内容

本发明的目的是为了克服已有的生防菌株生活力不强，生防机制单一，货架期短而提供一种具有广谱高效抑制植物病原菌和促进多种植物生长的能力，适合工业化生产，货架期长，适用于植物病害生物防治的球毛壳(Chaetomium globosum)优良菌株。该菌株可用于生产具有促生防病功能的多种生防产品。 

为解决上述问题，本发明是通过如下技术方案实现的： 

(一)本发明的球毛壳真菌菌株 

1、本发明的球毛壳真菌菌株被命名为球毛壳(Chaetomium globosum)菌株ND35，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地 址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日：2010年9月2日，保藏号为CGMCC No.4136。其有性态属于子囊菌门、核菌纲、球壳目、毛壳科、毛壳属。 

2、本发明所述的球毛壳ND35菌株的培养特征 

本发明球毛壳ND35菌株分离自本地白杨树，菌株在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(PDA)上培养，初期白色较浓密，后期淡褐色。在25℃条件下，5-6天菌落在PDA平板上扩展9cm，7天后从中心区域向外开始渐进产生子囊果，颜色逐渐变为橄榄绿色、橄榄褐色。15天后多个成熟子囊果聚集，密布整个PDA平板，在聚集的子囊果上方有肉眼可见稀疏辐射状的浅色菌丝覆盖(图1)。 

3、本发明所述的球毛壳ND35菌株的显微形态和超微结构特征