[发明专利]一种用于胚胎注射转染的沃尔巴克氏体(Wolbachia)的提取方法有效
申请号: | 201110230146.1 | 申请日: | 2011-08-11 |
公开(公告)号: | CN102277324A | 公开(公告)日: | 2011-12-14 |
发明(设计)人: | 奚志勇;朱俭 | 申请(专利权)人: | 广州沃巴克生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;A01N63/00;A01P7/04;C12R1/01 |
代理公司: | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人: | 刘明星;莫瑶江 |
地址: | 510663 广东省广州市高新技术产业*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 胚胎 注射 转染 巴克 wolbachia 提取 方法 | ||
1.一种用于胚胎注射转染的沃尔巴克氏体(Wolbachia)的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1):昆虫卵巢的制备:解剖含有沃尔巴克氏体的昆虫,获得其卵巢,置于SPG缓冲液中;
(2):将卵巢匀浆,用SPG缓冲液冲洗收集,然后置于离心机中离心100g~1000g,1min~10min,取上清再离心5000g~15000g,5~20min,去除上清,沉积物再用SPG缓冲液冲悬,再离心100g~1000g,1min~10min,取上清,即得到纯化的沃尔巴克氏体,该纯化的沃尔巴克氏体即可用于蚊子的胚胎注射。
2.根据权利要求1所述的用于胚胎注射转染的沃尔巴克氏体的提取方法,其特征在于,所述的含有沃尔巴克氏体的昆虫包括天然或人工感染沃尔巴克氏体的昆虫。
3.根据权利要求2所述的用于胚胎注射转染的沃尔巴克氏体的提取方法,其特征在于,所述的含有沃尔巴克氏体的昆虫为天然或人工感染沃尔巴克氏体的蚊子和果蝇。
4.根据权利要求1所述的用于胚胎注射转染的沃尔巴克氏体的提取方法,其特征在于,所述的沃尔巴克氏体的获取中步骤(2)为:将卵巢匀浆,用SPG缓冲液冲洗收集,然后置于离心机中离心,300g,5min,取上清再离心12000g,10min,去除上清,沉积物再用SPG缓冲液冲悬,再离心300g,5min,取上清,即得到纯化的沃尔巴克氏体。
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