[发明专利]多肽片段组合物及其在制备猪繁殖与呼吸综合征疫苗中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及多肽片段组合物及其在制备猪繁殖与呼吸综合征疫苗中的应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合症(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，又称为猪蓝耳病，在1987年首次发现于美国，而后迅速传播到加拿大。在欧洲，1990年首次爆发于德国，然后是挪威、比利时、西班牙、英国、法国和丹麦。如今这种疾病已经传播到世界各地，包括南美洲、北美洲、欧洲和亚洲。最近，在我国出现了高毒力变异株，它是由PRRS病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度传染病，可引起母猪的繁殖障碍、各年龄猪发生呼吸道症状以及仔猪死亡，此外还可以导致免疫抑制从而诱发继发感染，对全世界的养猪业都造成了巨大的经济损失。

PRRSV属于动脉炎病毒属，根据病毒抗原的抗原性、基因组及致病性差异，PRRSV可分为2个型，即欧洲型(LV株为代表)和美洲型(VR2332株为代表)。病毒粒子中含有一个核衣壳，核衣壳由正链RNA基因组和核衣壳蛋白(N)组成，核衣壳外边被一层囊膜包裹；病毒的囊膜含有6种病毒结构蛋白：小囊膜蛋白(E)、膜蛋白(M)以及N-糖基化蛋白GP2、GP3、GP4和GP5。M、N和GP5三种蛋白是PRRS病毒的主要结构蛋白，E、GP2、GP3和GP4是次要结构蛋白。M蛋白和GP5以二硫键相连的异源二聚体的形式存在于囊膜中，而次要结构蛋白E、GP2、GP3和GP4则可能是以非共价键结合在一起形成异源多聚体。

目前对关于PRRS的免疫机制缺乏系统的了解，但不少学者认为体液免疫(尤其是中和抗体)和T细胞介导免疫在清除机体PRRSV感染方面发挥主导作用。PRRSV感染猪后会在一定时期内抑制宿主的天然免疫和获得性免疫反应，尤其是抑制PRRSV特异性细胞免疫，使机体不能在感染早期及时清除病毒，从而造成病毒在机体内的持续性感染。研究表明，Nsp9、Gp3、Gp4、Gp5、M和N等蛋白在介导T细胞免疫上发挥着重要功能。

疫苗接种是预防PRRS最有效的方法，国内外已有商业化的PRRS疫苗，包括弱毒疫苗和灭活疫苗。但是，弱毒疫苗在提供免疫保护的同时，还会持续散播疫苗病毒，使得病毒在猪场中循环存在，可能发生重组变异等，并存在着毒力返强等不安全性问题，有时甚至引发PRRS爆发。而灭活疫苗存在着免疫剂量大、免疫次数多、免疫产生周期长，不能对非疫苗株型的病毒侵染提供免疫保护等缺点，不太适合仔猪免疫，而仔猪带毒是猪场PRRSV持续存在的重要原因。所以，通过弱毒疫苗或灭活疫苗难以控制和根除PRRSV在猪场的存在和流行。

随着近年来学者们对PRRSV本身以及病毒与动物的免疫应答机制的深入研究，提供一种能克服PRRS灭活疫苗和弱毒疫苗的缺点，并同时启动机体的细胞免疫和体液免疫应答的疫苗，已成为当前PRRS疫苗的研究热点，诸如基因工程疫苗(病毒载体、质粒载体及细菌载体等载体疫苗)、亚单位疫苗等。而采用化学合成抗原表位(B细胞表位和T细胞表位)氨基酸序列的方法制备具保护作用的化学合成多肽疫苗，不含核酸，是最为理想的安全性疫苗，也是目前研制预防和控制感染性疾病的主要方向之一。化学合成表位肽疫苗在口蹄疫的防治上已经取得了显著的成果。研制PRRS合成肽疫苗的关键之处在病毒组成蛋白上寻找可启动机体细胞免疫和/或体液免疫的抗原决定簇(即T细胞抗原表位和B细胞抗原表位)。

发明内容

本发明的目的是提供多肽片段组合物及其在制备猪繁殖与呼吸综合征疫苗中的应用。

本发明提供的多肽片段组合物，为序列表的序列1所示的多肽、序列表的序列2所示的多肽、序列表的序列3所示的多肽、序列表的序列4所示的多肽、序列表的序列5所示的多肽和序列表的序列6所示的多肽。

多肽Ⅰ(序列表的序列1)：TMPPGFELYGGGGSGGGGSFLLVGFKCF；

多肽Ⅱ(序列表的序列2)：CLLPSLLAIGGGGSGGGGSLAALICFVIRLAKNC；

多肽Ⅲ(序列表的序列3)：KGRLYRWRSPVIVEKGGGGSGGGGSCNDSTAPQKVLLAFS；

多肽Ⅳ(序列表的序列4)：ALKVSRGRLLGLLHLGGGGSGGGGSFGYMTFVHFESTNRV；

多肽Ⅴ(序列表的序列5)：KFITSRCRLCLLGRKGGGGSGGGGSNPEKPHFPL；

多肽Ⅵ(序列表的序列6)：VRHHFTPSEGGGGSGGGGSFSLPTQHTVRLIRATAS。