[发明专利]复方丹参提取物中糖类成分的含量测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种中药提取物中有效成分的含量测定方法，特别涉及复方丹参提取物中糖类成分的含量测定方法，该提取物为复方丹参滴丸的原料。

背景技术：

复方丹参制剂为丹参、三七和冰片制备而成的心血管药物，目前已经上市的又复方丹参胶囊，复方丹参片和复方丹参滴丸。特别是复方丹参滴丸在临床上广泛用于冠心病、心绞痛的预防、治疗、急救。现已成为国内心血管市场上的主导品牌之一。

复方丹参提取物，为丹参和三七的提取物，是复方丹参制剂中间体，属于现有技术，复方丹参制剂上市十余年中，复方丹参提取物已经建立起了一整套全面地的工艺质量控制体系，并且不断进行完善和补充。

糖类成分：糖类成分可分布于植物的各个部位，常常占植物干重的80％～90％，是中药材及中药产品中的主要组成成分，所占含量比例很高。另外，许多糖类成分对于中药活性成分具有辅助药效作用，同时糖类成分本身也具有为机体提供能量的作用，因此糖类成分的测定对于全面掌握中药材及中药产品质量非常重要。测定结果表明，复方丹参提取物中主要含有蔗糖、果糖和葡萄糖等小分子糖类物质，且含量较高，所以测定它们的含量非常必要。

糖类成分的测定：针对糖类成分的常用测定方法有化学分析法、气相色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、衍生化气相色谱法等。但这些方法稳定性差，灵敏度不高。

为得到一种新的复方丹参提取物中糖类成分的含量测定方法，本发明采用高效液相色谱蒸发光散射检测器(HPLC-EL SD)法，具有稳定性好、灵敏度高、能够进行梯度洗脱等优点。

本发明采用PrevailTM Carbohydrate ES色谱柱，对于各个小分子糖类的分离度大大提高。相对于常用的氨基柱，具有噪音低，色谱柱寿命长的特点，是本专利的最大优势所在。

本发明以最简单的乙腈-水为流动相，梯度洗脱，能够在30分钟内有效的分离检测7种糖类物质和杂质，分离度均大于3，达到高效、快速分离。

本发明采用固相萃取技术，能够有效去除酚酸、皂苷等干扰成分。

经验证本发明的质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性良好，能够有效测定复方丹参提取物中的糖类物质含量。

本发明是针对复方丹参提取物中含量较高的糖类成分建立的含量测定方法，目的是进一步提升产品质量控制水平，从而更加准确的把握产品质量。

发明内容：

本发明的目的是提供一种专属性强、灵敏度高、稳定准确的糖类成分测定方法，用于复方丹参提取物中糖类成分的含量测定，该方法包括以下步骤：

1)糖类成分对照品溶液的制备

2)对复方丹参提取物进行溶解，上固相萃取小柱，水洗脱，收集洗脱液；

3)采用高效液相色谱法进行样品测定。采用PrevailTM Carbohydrate ES色谱柱，以一定比例的有机溶剂和水为流动相，进行梯度洗脱；

4)以ELSD检测器进行检测；

5)用外标两点法对数方程分别计算果糖、葡萄糖和蔗糖的含量。

其中所述糖类成分为果糖，葡萄糖和蔗糖。

其中所述复方丹参提取物为一种混合物，是由丹参和三七分别或一同经过水煮得到的浸膏，如果分别得到，则两者混合在一起。

或丹参和三七分别或一同经过有机溶剂提取得到的浸膏，如果分别得到，则两者混合在一起。所述有机溶剂为醇类有机溶剂，醇类有机溶剂，优选乙醇。

本发明所述复方丹参提取物还可以是丹参和三七分别或一同经过水煮醇沉得到的，也可以是丹参和三七分别或一同经过醇提水沉得到的，还可以是在以上步骤的基础上进一步经过选自萃取，过柱，酸化，碱化等步骤得到的，如果分别得到，则两者混合在一起。

本发明的复方丹参提取物中糖类成分的含量测定方法，优选的包括以下步骤：

1)糖类成分对照品溶液的制备；精密称取经五氧化二磷干燥过的果糖对照品、葡萄糖对照品、蔗糖对照品适量，加水制得每毫升含上述物质各0.5mg的混合对照溶液。

2)复方丹参提取物供试品溶液的制备；取复方丹参提取物约0.5g，精密称定，加水约20ml，超声溶解，上至已处理好的固相萃取柱(Cleanert PS-SPE，0.5g/6ml)，流速约1ml/min，再用水分次洗涤，收集上样液和洗涤流出液约45ml，转移至50ml量瓶中，加水至刻度，混匀，即得。