[发明专利]一种5-羟甲基糠醛完全抗原的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及5-羟甲基糠醛完全抗原，特别是涉及一种5-羟甲基糠醛-牛血清白蛋白的合成方法，属于生物化工技术领域。

背景技术

5-羟甲基糠醛(又名5-羟甲基-2-糠醛、羟甲基糠醛、5-羟甲基呋喃甲醛或5-羟甲基-2-呋喃甲醛)，英文名5-hydroxymethyl-2-furfural或5-HMF，为针状结晶、暗黄色液体或粉末，甘菊花味，有吸湿性，易溶于水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等；可溶于乙醚、苯、氯仿等；微溶于四氯化物；难溶于石油醚，是一种重要的化工原料。其分子中有一个醛基和一个羟甲基，可以通过加氢、氧化脱氧、酯化、卤化、聚合、水解以及其它化学反应，用于合成许多有用化学物和新型高分子材料，包括医药、树脂类塑料等。然而，据有关文献报道5-羟甲基糠醛对人体横纹肌和内脏有损害，同时也是导致神经性疾病的主要因素，其在食品药品中的大量存在会严重危害人体健康，世界卫生组织已经对蜂蜜中5-羟甲基糠醛的含量加以控制，中国药典也对葛根素葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的含量有非常严格的控制。因此，通过检测进而控制食品药品中5-羟甲基糠醛的含量具有重要的现实意义。

目前，国内外有关检测5-羟甲基糠醛的方法主要有：比色法、紫外法以及高效液相色谱法(HPLC)。比色法中由于5-羟甲基糠醛并非葡萄糖注射液变色的唯一因素，该法专属性和准确性较差；紫外法对被测样品的浓度，各个国家有不同的要求，没有统一的标准，很难确定最终的检测结果；使用高效液相色谱法，虽然可以非常准确的测出样品中5-羟甲基糠醛的含量，但是，此法需要昂贵的仪器设备和专业技术人员，对被检材料要求较高，样品预处理及操作过程复杂，费时又费力，已经不能满足现代检测对方便、快速、准确的要求。目前，国内尚无使用免疫快速检测法检测食品药品中5-羟甲基糠醛含量的报道，为了弥补这一空白，为今后人们在免疫检测方面的研究提供材料，设计了以5-羟甲基糠醛为半抗原的合成可用于免疫检测用的5-羟甲基糠醛完全抗原。

发明内容

针对现有仪器检测技术的缺点和不足，本发明的目的是提供一种5-羟甲基糠醛完全抗原的制备方法，所制备的产品可用于食品药品中5-羟甲基糠醛含量的免疫检测，为后续研究、开发及应用提供必需的人工抗原。

本发明是以5-羟甲基糠醛为半抗原，用戊二醛为连接臂将半抗原与牛血清白蛋白结合在一起，制备5-羟甲基糠醛的人工抗原，即5-羟甲基糠醛-牛血清白蛋白。

本发明的目的通过如下技术方案实现。

一种5-羟甲基糠醛完全抗原的合成方法，包括如下步骤：

(1)A液的配制：将5-羟甲基糠醛溶解于戊二醛水溶液中，配成5-羟甲基糠醛质量浓度为0.1g/L～5g/L的混合液，在10℃～60℃条件下反应0.1h～3h，制备A液；

(2)B液的配制：将牛血清白蛋白溶解于磷酸盐缓冲液中，配成牛血清白蛋白浓度为0.1g/L～10g/L的B液；

(3)人工抗原的合成：在搅拌条件下，将B液滴加到A液中，在温度为10℃～60℃条件下反应0.1h～5h，得到人工抗原混合液；

(4)透析：将人工抗原混合液装入能透过分子量为1kDa～100kDa的透析袋中，用磷酸盐缓冲液透析1天～5天；透析结束后，干燥，得到5-羟甲基糠醛完全抗原。

为进一步实现本发明，所述的戊二醛水溶液的浓度优选0.1mol/L～1.0mol/L，pH 2～7。

所述步骤(2)和步骤(4)的磷酸盐优选磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和磷酸二氢钾中的一种或两种。

所述步骤(2)和步骤(4)所述的磷酸盐缓冲液的浓度优选0.07～0.25mol/L，pH为7.0～7.9。

所述搅拌优选磁力搅拌或电动搅拌。

所述干燥优选冷冻干燥或真空干燥。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

产率高：采用戊二醛作为5-羟甲基糠醛与牛血清白蛋白结合的连接臂，克服了5-羟甲基糠醛与牛血清白蛋白直接偶联速度慢、效率低的缺点，极大提高了5-羟甲基糠醛与牛血清白蛋白的偶联速度和效率，使5-羟甲基糠醛-牛血清白蛋白完全抗原的产率提高。

稳定性好：采用戊二醛作为5-羟甲基糠醛与牛血清白蛋白结合的连接臂，最大程度地保护了5-羟甲基糠醛分子中的活性基团：醛基(-CHO)，保留了5-羟甲基糠醛的生物活性，从而提高了5-羟甲基糠醛-牛血清白蛋白完全抗原的稳定性。