[发明专利]一种丙型肝炎病毒重组蛋白及基因序列

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别是一种丙型肝炎病毒重组蛋白及基因序列，可用于同时检测HCV抗体和核心抗原。

背景技术

丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)引发的传染性疾病，感染者一般无症状或者症状不明显，但是一旦感染，大多将转变慢性HCV感染，导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，甚至发展成为肝癌。目前全球有超过1.7亿人感染丙型肝炎病毒，在美国每年新感染HCV者近4万人，其中约85%为急性感染者。在中国，HCV感染率约为3.2%，人数超4000万。由此可见，HCV造成了对人类健康的极大危害，因此，从某种程度上说HCV感染已成为严重的公共卫生和社会问题。

    HCV的传播途径主要有以下几种：第一，母婴传播，具有感染HCV母亲在围产期传播给新生儿的概率在2%左右；第二，性传播，有多位性伴侣者及男同性恋者HCV感染率大约1%；第三，经血液传播，主要集中在输血，献血的过程中感染HCV，这是HCV感染的主要途径。因此，有效的控制及遏制HCV在血液中的传播能够极大的降低新感染病例。

    对HCV的检测主要集中在核酸即HCV RNA和HCV抗体两个方面，但在RNA检测上不仅需要有专业人员及相关精密仪器设备等，还需要花费大量的时间，另外，RNA的不稳定性也造成了很多漏检。目前在HCV抗体筛查方面，主要为酶联免疫(ELISA)诊断试剂盒和胶体金试剂条，其中ELISA诊断试剂盒经历了三代产品，第三代ELISA诊断试剂盒虽然比第一、第二代试剂有明显的改进，但其采用间接法原理进行HCV抗体检查，无法避免由于方法学所带来的低灵敏度和假阳性等问题，而且HCV感染的“窗口期”通常还需要平均70多天，因此，第三代HCV抗体检测试剂仍需要提高和改进。而在胶体金试剂条方面大多也为间接法原理，和ELISA诊断试剂盒存在相同的缺点，虽然也有采用双抗原夹心法检测HCV抗体，但也解决不了“窗口期”的问题，对早期的诊断仍然效果很差，因此亟待开发同时检测HCV抗原和抗体的诊断试剂，才能及早的发现感染者，以期能极大地降低HCV感染病例。

体外诊断核心原料的开发则是开发相应诊断试剂的先决条件，只有开发出具有高活性，高性能的抗原抗体，体外诊断试剂产品才能成为现实，因此，针对HCV抗体和抗原开发出能够用以生产诊断试剂的原料迫在眉睫，从某种程度上说，原料的开发也必将成为降低HCV感染首要解决的问题。

目前大多生产原料公司在HCV重组抗原中所取片段为NS3，NS4，NS5，core部分片段，且为连续片段。存在诸多方面的缺点，如：1)缺少了其他蛋白E1，E2主要抗原表位，这样极容易造成最终诊断产品的漏检现象；2)由于大多取的是连续片段，不可避免地加入了一些非抗原表位的序列，这样又给快诊产品带来假阳性风险。

发明内容

本发明的目的在于提供一种丙型肝炎病毒重组蛋白，其特征在于，所述丙型肝炎病毒重组蛋白是丙型肝炎病毒主要抗原决定簇和丙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体的融合蛋白。

进一步地，上述丙型肝炎病毒重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的另一个目的在于提供丙型肝炎病毒重组蛋白在制备丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒上的应用。

本发明还有一个目的在于提供丙型肝炎病毒重组蛋白在制备丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒上的应用。

本发明还提供了编码SEQ ID NO.1的丙型肝炎病毒重组蛋白基因，其碱基序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明提供了一种含有丙型肝炎病毒重组蛋白基因的重组载体，其特征在于，在质粒pET30a中包含有SEQ ID NO.2核苷酸序列。

本发明最后提供了一种利用权利要求6所述重组载体构建的大肠杆菌表达载体。本发明的表达系统为大肠杆菌表达系统，它具有周期短，费用低，表达量大等特点。

为了使得重组蛋白更好的保持活性位点，本发明选择比较温和的培养和诱导条件，其表达时的诱导温度为25度，诱导转速为250rpm，诱导的IPTG浓度为0.1mM。这样使得重组蛋白有了更加缓慢的表达，有充分的时间进行空间构象的形成。表达产物具有两个结构部分，一为丙型肝炎病毒主要抗原决定簇，二为丙型肝炎病毒核心蛋白的单链抗体。

本发明利用基因工程重组技术，在大肠杆菌系统中表达丙型肝炎病毒主要抗原决定簇-—核心蛋白单链抗体的融合蛋白，具有生产周期短，产量高，成本低的优点。本发明的重组蛋白可做为丙型肝炎病毒免疫诊断试剂盒的一部分。